Technischer Tipp zur Probenvorbereitung
Niveau: Mittelstufe
Warum sind meine Wiederfindungsraten höher als 100%?
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Bei der Analytextraktion mit SPE erwarten wir eine Wiederfindung von 100%. Wenn die Wiederfindung geringer ist, deutet dies darauf hin, dass es ein Problem mit der Rückgewinnung des Analyten aus dem Sorbens gibt. Aber worin liegen einige der Gründe, warum die Wiederfindung möglicherweise größer ist als erwartet (oder über 100%)?
Häufige Probleme
- Koeluierende Interferenzen
- Verunreinigungen aus dem ausgewählten Lösungsmittel oder den ausgewählten Sorbentien
- Kompromittierter interner Standard, wodurch Ihr Bezugspunkt ungenau wird
- Ungenaue Berechnungen der Wiederfindung
Lassen Sie uns jedes dieser einzelnen Probleme untersuchen
Koeluierende Interferenzen:
Diese sind typischerweise in der Matrix vorhanden und das Ziel des SPE-Schrittes ist es, sie zu entfernen. Wenn die Wiederfindung mehr als 100% beträgt, besteht der erste Schritt darin, den Eluenten mit einer orthogonalen Analysetechnik zu überprüfen, um festzustellen, ob die erhöhte Wiederfindung das Ergebnis einer Koelution ist. Wenn eine Koelution identifiziert wird, gibt es einige mögliche Lösungen diese zu beheben.
- Modifizieren Sie die Waschschritte der SPE-Methode, um die Verunreinigung beim Waschen selektiv zu entfernen.
- Wählen Sie ein alternatives SPE-Sorbens, das diese Verunreinigungen besser entfernt. Dies ist einfacher, wenn der Analyt / die Verunreinigung selektiv ionisiert werden kann, da ein Ionenaustauscher-Sorbens sehr oft sauberere Extrakte als entweder Umkehr- oder Normalphasenlösungen liefert.
- Passen Sie Ihre Analysemethode so an, dass die zwei Peaks analytisch aufgelöst werden, damit es nicht mehr nötig ist, diese Verunreinigung während des SPE-Schritts zu entfernen.
- Analysieren Sie eine Plasmablindprobe, um die vorhandenen Verunreinigungen festzustellen. Verwenden Sie diese Blindprobe in den Berechnungen, um sie von Ihrer Wiederfindung abzuziehen.
Verunreinigungen aus dem Lösungsmittel oder Sorbens:
Dabei handelt es sich in der Regel um Verunreinigungen in den Materialien, die in ihren Eigenschaften der zu analysierenden Verbindung ähnlich sind und infolgedessen während der SPE und der anschließenden Analyse mit ihr koeluieren. Sie können die obigen Schritte befolgen, um koeluierende Verunreinigungen zu entfernen. Alternativ, da es sich nicht um eine in Ihrer Matrix vorhandene Verunreinigung handelt, können Sie die im Sorbens vorhandenen Verunreinigungen mittels Blindprobeanalysen ermitteln und diese während der Berechnung von Ihrem Hauptpeak subtrahieren. Wenn Sie Ihr Sorbens vor der Zugabe Ihrer Probe mit dem Elutionslösungsmittel äquilibrieren, sollte dies potenzielle Verunreinigungen vor der Probenzugabe aus dem Sorbens herausspülen. Bei Verunreinigungen, die aus dem Lösungsmittel eingebracht werden, sollte dies in der Regel durch Wechseln des Lösungsmittels gelöst werden.
Kompromittierter interner Standard:
Wenn Ihr interner Standard keine 100%ige Wiederfindung zeigt, werden Ihre nachfolgenden Berechnungen ungenau sein. Es ist immer eine gute Praxis, einen internen Standard zu verwenden, der den Eigenschaften Ihrer Zielverbindung ähnelt, da dies den konsistenteren Bezugspunkt für Ihre Methode darstellt. Wenn Bedenken bestehen, dass Ihr interner Standard mit Ihrer Methode keine gute Wiederfindung vom SPE-Material zeigt, können Sie zur Berechnung der absoluten Wiederfindung einen externen Standard verwenden, der dem Elutionslösungsmittel zugesetzt wird.
Wiederfindungsberechnungen sind ungenau:
Dieser Schritt ist wichtig, um festzustellen, wo die Fehler auftreten.
- Berechnungsfehler - überprüfen Sie alle Berechnungen und berücksichtigen Sie alle Verdünnungsfaktoren.
- Integrationsfehler - reintegrieren Sie alle Peakflächen und verwenden Sie manuelle Berechnungen zur Bestätigung.
- Fehler in der Analysemethode - stellen Sie sicher, dass die verwendete Analysemethode eine korrekte Integration und Berechnung ermöglicht. Stellen Sie sicher, dass keine starken Lösungsmittel für die Injektion verwendet werden, und führen Sie eine Kalibrierung über eine Reihe von Verdünnungen durch, um die Linearität zu gewährleisten. Beheben Sie Fehler in Ihrer Analysemethode, um alle Faktoren zu bestimmen, die zu einer schlechten Reproduzierbarkeit führen können.
- Stellen Sie sicher, dass die ausgewählten Detektionen angemessen sind und korrekt funktionieren.
Wir hoffen, dieser Tipp war hilfreich für Sie! Sie finden weitere Ressourcen unter Ressourcen zur Festphasenextraktion. Sehen Sie sich auch unsere unten vorgestellten Produkte an.
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Strata ist eine Marke von Phenomenex.
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
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