Astuces techniques sur la préparation d’échantillon
Niveau : Avancé
Ma méthode SPE fournit une faible récupération, comment puis-je résoudre le problème ?
Si vous utilisez une méthode reconnue, nous vous recommandons de :
• Vérifier toutes les solutions utilisées pour la méthode SPE afin de s'assurer que rien n'a été mal étiqueté, etc.
• Examiner le processus : le débit était-il potentiellement trop rapide pendant la charge ou l'élution ? Les cartouches ont-elles pu sécher entre l'équilibrage et la charge de l'échantillon ?
Il est généralement plus rapide de simplement refaire l'extraction, en faisant attention à ces points.
Si toutefois vous développez une nouvelle méthode, il sera nécessaire de suivre votre analyte à chaque étape. La première chose que nous vous recommandons est de préparer une solution contenant l'analyte mais pas la matrice de l'échantillon (à utiliser comme échantillon idéal). Ensuite, passez en revue votre méthode :
1. Conditionner la cartouche.
2. Équilibrer la cartouche.
3. Charger l'échantillon, en collectant la fraction qui coule.
4. Analyser cette fraction pour voir si elle contient l'analyte. Si cette fraction contient l'analyte, cela suggère que :
- Le solvant de l'échantillon est trop fort ou le pH est incorrect.
- Le débit de charge est trop élevé.
- Il y a une perte d'échantillons parce que soit la quantité d'échantillon à charger est trop élevée, soit la masse du sorbant est trop faible.
5. Laver la cartouche en conservant chaque fraction de lavage dans un flacon séparé.
6. De nouveau, analyser cette fraction pour voir si elle contient l'analyte. Si l'analyte est présent dans la fraction de lavage, cela suggère que :
- Le solvant de lavage est trop fort.
- Le solvant de lavage n'a pas le pH correct.
7. Si l'analyte n'a pas été retrouvé dans les fractions de charge ou de lavage, c'est qu'il est retenu sur la cartouche.
- Essayer d'utiliser un solvant d'élution plus fort.
- S'assurer que le pH du solvant d'élution est correct.
- Si les deux premières suggestions n'aident pas, essayer d'utiliser un sorbant moins rétentif (en phase inverse, essayer de changer une cartouche C18 pour une C8 si les analytes sont très hydrophobes).
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