Wskazówka techniczna dotycząca przygotowania próbki
Poziom: Średniozaawansowany
Dlaczego moje odzyski są większe niż 100%?
Podczas ekstrakcji analitu za pomocą SPE oczekujemy 100% odzysku. Jeśli odzysk jest niższy, sugeruje to problem z odzyskaniem analitu z sorbentu, ale jakie są niektóre z powodów, dla których można zobaczyć odzysk większy niż oczekiwany (lub ponad 100%)?
Typowe problemy:
- Koelucja zanieczyszczenia
- Zanieczyszczenia z rozpuszczalnika lub wybranych sorbentów
- Problem ze standardem wewnętrznym, co sprawia, że punkt odniesienia jest niedokładny
- Niedokładne obliczenia odzysku
Przeanalizujmy każdy z tych typowych problemów.
Koelucja zanieczyszczenia:
Są one zazwyczaj obecne w matrycy, a celem etapu SPE jest ich usunięcie. Jeśli doświadczasz odzysków większych niż 100%, pierwszym krokiem będzie sprawdzenie eluatu za pomocą ortogonalnej techniki analitycznej, aby zidentyfikować, czy zwiększony odzysk jest wynikiem współwystępowania. Gdy współwystępowanie zostanie zidentyfikowane, istnieje kilka możliwych rozwiązań.
- Zmodyfikuj etapy przemywania metody SPE, aby selektywnie usunąć zanieczyszczenie podczas przemywania.
- Wybierz alternatywny sorbent SPE, który lepiej usunie te zanieczyszczenia. Jest to łatwiejsze, jeśli analit/zanieczyszczenie można selektywnie zjonizować, ponieważ sorbent jonowymienny bardzo często zapewni czystsze.
- Dostosuj swoją metodę analityczną, aby rozdzielić dwa piki na chromatogramie, eliminując konieczność usuwania tego zanieczyszczenia podczas etapu SPE.
- Przeprowadź próbę ślepą osocza, co pozwoli ci określić obecne zanieczyszczenia i użyć tej próbki w obliczeniach, aby odjąć ją od odzysku próbki badanej.
Zanieczyszczenia z rozpuszczalnika lub sorbentu:
Zanieczyszczenia te będą zazwyczaj obecne w materiałach wyjściowych, które są podobne do twojego związku docelowego i w wyniku tego współwymywają się z nim podczas SPE i późniejszej analizy analitycznej. Możesz postępować zgodnie z powyższymi krokami, aby usunąć współwymywające się zanieczyszczenia lub alternatywnie, ponieważ nie jest to zanieczyszczenie obecne w twojej matrycy, możesz zidentyfikować poziom obecny w sorbencie za pomocą prób ślepych i odjąć go od głównego piku podczas obliczeń. Przed dodaniem próbki, jeśli zrównoważysz sorbent rozpuszczalnikiem elucyjnym, powinno to wypłukać potencjalne zanieczyszczenia z sorbentu przed dodaniem próbki.
W przypadku zanieczyszczeń wprowadzonych z rozpuszczalnika, zazwyczaj zmiana rozpuszczalnika powinna rozwiązać ten problem.
Naruszenie wzorca wewnętrznego:
Jeśli twój standard wewnętrzny nie wykazuje 100% odzysku, twoje późniejsze obliczenia będą niedokładne. Zawsze warto stosować standard wewnętrzny podobny do twojego związku docelowego, ponieważ zapewni to bardziej spójny punkt odniesienia dla twojej metody. Jeśli istnieje obawa, że twój standard wewnętrzny nie wykazuje dobrego odzysku z materiału SPE przy użyciu twojej metody, możesz użyć standardu zewnętrznego, który jest dodawany do rozpuszczalnika elucyjnego, aby obliczyć odzysk bezwzględny.
Obliczenia odzysku są niedokładne:
Ważne jest, aby postępować krok po kroku, aby ustalić, gdzie pojawiają się błędy.
- Błędy obliczeniowe - Sprawdź wszystkie obliczenia i uwzględnij wszystkie czynniki rozcieńczenia.
- Błędy integracji - Zintegruj ponownie wszystkie piki i użyj ręcznych obliczeń, aby potwierdzić.
- Błędy metody analitycznej - Upewnij się, że używana metoda analityczna pozwala na prawidłową integrację i obliczenia. Upewnij się, że do nastrzyku nie są używane silne rozpuszczalniki i przeprowadź kalibrację na kilku rozcieńczeniach, aby zapewnić liniowość. Rozwiąż problemy z metodą analityczną, aby określić czynniki, które mogą prowadzić do słabej powtarzalności.
- Upewnij się, że wybrane detektory są odpowiednie i działają poprawnie.
Mamy nadzieję, że ta wskazówka była przydatna! Sprawdź nasze zasoby dotyczące ekstrakcji na fazie stałej i nasze produkty wymienione poniżej. Do zobaczenia w przyszłym miesiącu z kolejną wskazówką!
Strata™ Solid Phase Extraction
Strata-X Solid Phase Extraction
Znaki towarowe
Strata jest znakiem towarowym Phenomenex.
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
CONNECT WITH US
