Astuces techniques sur la préparation d’échantillon
Niveau : Intermédiaire
Pourquoi ma récupération est-elle supérieure à 100 % ?
Lorsque nous effectuons l'extraction d'un analyte en SPE, nous nous attendons à une récupération de 100 %. Si la récupération est plus faible, cela suggère qu'il y a un problème de récupération de l'analyte à partir du sorbant, mais quelles sont les raisons pour lesquelles vous pouvez constater une récupération supérieure à ce que vous attendiez (ou supérieure à 100 %) ?
Problèmes communs
- Interférences de coélution
- Contaminants du solvant ou des sorbants sélectionnés
- Problème d'étalon interne, rendant votre point de référence inexact
- Calculs de récupération inexacts
Examinons chacun de ces problèmes courants.
Interférences de coélution :
Elles sont généralement présentes dans la matrice et l'objectif de la SPE est de les éliminer. Si la récupération est supérieure à 100 %, la première étape consiste à vérifier l'éluant en utilisant une technique d'analyse orthogonale pour identifier que l'augmentation de la récupération est le résultat d'une coélution. Lorsqu'une coélution est identifiée, il y a plusieurs solutions possibles.
- Modifiez les étapes de lavage de la méthode SPE pour éliminer sélectivement l'impureté pendant le lavage.
- Choisissez un autre sorbant SPE qui permettra de mieux éliminer ces impuretés. Cela est plus facile si l'analyte / l'impureté peut être sélectivement ionisé car un sorbant échangeur d'ions permet très vite d'obtenir des extraits plus propres que les solutions en phase normale ou inverse.
- Ajustez votre méthode d'analyse pour séparer les deux pics analytiquement, ce qui supprime la nécessité d'éliminer cette impureté pendant l'étape de SPE.
- Analysez un échantillon de plasma à blanc, cela vous permettra de déterminer les impuretés présentes. Utilisez ce blanc dans les calculs pour le soustraire de votre récupération.
Contaminants provenant du solvant ou du sorbant :
Il s'agit généralement d'impuretés présentes dans les matières premières qui sont de nature similaire à votre composé cible et qui, par conséquent, coéluent avec lui lors de l'étape de SPE et de l'analyse. Vous pouvez suivre les étapes ci-dessus pour éliminer les impuretés de coélution ou, comme il ne s'agit pas d'une impureté présente dans votre matrice, vous pouvez identifier la quantité présente dans le sorbant en utilisant des essais à blanc et le soustraire de votre pic principal pendant le calcul. Avant d'ajouter votre échantillon, vous pouvez équilibrer votre sorbant avec le solvant d'élution ; cela devrait éliminer les contaminants potentiels du sorbant avant d'ajouter l'échantillon.
Pour les impuretés issues du solvant, le fait de changer de solvant devrait résoudre ce problème.
Etalon interne compromis :
Si votre étalon interne n'indique pas une récupération de 100 %, vos calculs ultérieurs seront inexacts. Il est toujours recommandé d'utiliser un étalon interne de même nature que votre composé cible, car cela donnera un point de référence plus fiable pour votre méthode. Si votre étalon interne n'indique pas une bonne récupération en SPE selon votre méthode, vous pouvez utiliser un étalon externe qui est ajouté au solvant d'élution pour calculer la récupération absolue.
Les calculs de recouvrement sont inexacts :
Cette étape est importante pour déterminer où les erreurs apparaissent.
- Erreurs de calcul - vérifiez tous les calculs et tenez compte de tous les facteurs de dilution.
- Erreurs d'intégration - réintégrez tous les pics et utilisez des calculs manuels pour vérifier.
- Erreurs de méthode d'analyse - assurez-vous que la méthode d'analyse utilisée permet une intégration et un calcul corrects. Assurez-vous qu'aucun solvant fort n'est utilisé pour l'injection et effectuez un étalonnage sur un certain nombre de dilutions pour garantir la linéarité. Vérifiez votre méthode d'analyse pour déterminer les facteurs qui peuvent entraîner une mauvaise reproductibilité.
- Assurez-vous que les paramètres de détection sélectionnés sont appropriés et fonctionnent correctement.
Nous espérons que cette astuce vous a été utile ! Découvrez nos ressources sur l'extraction en phase solide et nos produits mis en avant ci-dessous. Rendez-vous le mois prochain pour une autre astuce !
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