Technischer Tipp zur Probenvorbereitung
Nievau: Fortgeschritten
Ich erhalte eine geringe Wiederfindung bei meiner SPE Methode. Wie kann ich das Problem beheben?
Tipps in anderen Sprachen
Wenn Sie mit einer bekannten, guten Methode arbeiten, würden wir Ihnen dies empfehlen:
- Überprüfen Sie alle für die SPE-Methode verwendeten Lösungen um sicherzustellen, dass nichts falsch etikettiert wurde usw.
- Betrachten Sie den Prozess. War der Fluss während des Beladens oder Eluierens möglicherweise zu schnell? Hätte man die Kartuschen zwischen der Equilibrierung und dem Laden der Probe trocknen lassen dürfen?
Im Allgemeinen ist es am schnellsten, die Extraktion einfach zu wiederholen und dabei diese Punkte zu beachten.
Wenn Sie jedoch eine neue Methode entwickeln, wird es notwendig sein, Ihren Analyten "aufzuspüren". Als erstes würden wir empfehlen, eine Lösung des Analyten ohne Probenmatrix herzustellen (als ideale Probe zu verwenden). Dann bearbeiten Sie die Probe nach folgender Methode:
1. Konditionieren Sie die Säule.
2. Equilibrieren Sie die Säule.
3. Geben Sie die Probe auf und sammeln Sie den Durchfluss.
4. Analysieren Sie diese auf den Gehalt an Analyten. Wenn in dieser Fraktion Analyt gefunden wird, würde dies nahe liegen, dass:
- das Probenlösungsmittel zu stark ist oder dass der pH-Wert falsch ist.
- der Ladedurchfluss zu hoch ist.
- Sie einen Durchbruch haben, weil entweder die Probenbelastung zu hoch oder die Sorbensmasse zu niedrig ist.
5. Waschen Sie die Säule unter Beibehaltung der Waschfraktion.
6. Analysieren Sie erneut auf den Analytgehalt. Wenn Analyt in der Waschfraktion gefunden wird, ist dies ein Hinweis dafür:
- dass das Waschlösungsmittel zu stark ist.
- dass das Waschlösungsmittel nicht den richtigen pH-Wert hat.
7. Wenn der Analyt nicht in den Lade- oder Waschfraktionen gefunden wurde, muss der Analyt auf der Säule retiniert geblieben sein
- Versuchen Sie, ein stärkeres Elutionslösungsmittel zu verwenden.
- Stellen Sie sicher, dass der pH-Wert des Elutionslösungsmittels korrekt ist.
- Wenn die ersten beiden Vorschläge nicht helfen, versuchen Sie, ein weniger retentives Sorbens zu verwenden (im Falle von Reversed Phase versuchen Sie zum Beispiel, eine C18-Kartuche gegen eine C8-Kartusche auszutauschen, wenn die Analyten sehr hydrophob sind.
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
CONNECT WITH US
