Wskazówka techniczna dotycząca przygotowania próbki
Poziom: Zaawansowany
Uzyskuję niski odzysk z metody SPE, jak mogę rozwiązać ten problem?
Jeśli pracujesz z dobrze znaną metodą, zalecamy:
- Sprawdź wszystkie roztwory używane w metodzie SPE, aby upewnić się, że żaden nie jest przeterminowany lub źle oznakowany.
- Rozważyć, czy zastosowany przepływ był zbyt szybki podczas nanoszenia lub elucji? Czy kolumienki mogły wyschnąć między kondycjonowaniem a nanoszeniem próbki?
Ogólnie rzecz biorąc, najszybciej jest po prostu powtórzyć ekstrakcję, zwracając uwagę na te punkty.
Jeśli jednak opracowujesz nową metodę, konieczne będzie "wyśledzenie" analitu. Pierwszą rzeczą, którą zalecamy, jest przygotowanie roztworu analitu bez matrycy próbki (aby użyć go jako idealnej próbki). Następnie przejdź przez metodę próbkowania, zbierając eluent z każdego kroku, który potencjalnie zawiera analit:
1. Kondycjonowanie kolumienki
2. Zrównoważenie kolumienki
3. Załaduj próbkę i zbierz frakcję w fiolce.
4. Przeanalizuj to pod kątem zawartości analitu. Znalezienie analitu w tej frakcji sugeruje:
- Rozpuszczalnik próbki jest zbyt silny lub pH jest nieprawidłowe.
- Przepływ podczas nanoszenia jest zbyt szybki
- Dochodzi do „przebicia” złoża, ponieważ albo masa próbki jest zbyt duża, albo masa sorbentu jest zbyt niska.
5. Przemyj kolumienkę, zbierając każdą frakcję myjącą do osobnej fiolki.
6. Ponownie przeanalizuj zawartość pod kątem analitu. Jeśli analit zostanie znaleziony we frakcji płuczącej, oznacza to, że:
- Rozpuszczalnik przepłukujący jest zbyt silny
- Rozpuszczalnik przepłukujący nie ma prawidłowego pH.
7. Jeśli analit nie został znaleziony we frakcji zebranej podczas nanoszenia lub przepłukania, analit został zatrzymany na kolumience.
- Spróbuj użyć silniejszego rozpuszczalnika do elucji.
- Upewnij się, że pH rozpuszczalnika elucyjnego jest prawidłowe.
- Jeśli pierwsze 2 sugestie nie pomogą, spróbuj użyć mniej retencyjnego sorbentu (w fazie odwróconej spróbuj zamienić wkład C18 na C8, jeśli anality są bardzo hydrofobowe).
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
CONNECT WITH US
