Suggerimento Tecnico per la Preparazione del Campione
Livello: Avanzato
Ho un basso recupero con il mio metodo SPE, come posso risolvere il problema?
Se stai lavorando con un metodo consolidato, ti consigliamo di:
• Controllare tutte le soluzioni utilizzate/preparate per il metodo SPE per assicurarsi che nulla sia
scaduto o etichettato erroneamente.
• Controllare l’intero processo. Il flusso durante il caricamento/eluizione è troppo alto? La cartucca
SPE è andata a secco tra l'equilibratura e il caricamento del campione?
Si consiglia di ripetere semplicemente l'estrazione, prestando attenzione a questi punti.
Se, tuttavia, stai sviluppando un nuovo metodo, potrebbe essere necessario individuare il punto in cui il tuo analita viene perso. La prima cosa che raccomandiamo è di preparare una soluzione dell'analita senza matrice (da utilizzare come campione ideale). Durante l’esecuzione del metodo conserva gli eluati di ciascun passaggio in quanto potrebbero contenere l'analita.
1. Condizionare la cartuccia.
2. Equilibrare la cartuccia.
3. Caricare il campione e raccogliere il “flow-through”.
4. Analizzare il “flow-through” per verificare il contenuto di analita. Se l'analita è presente in questa frazione, allora vuol dire che:
- ll solvente di caricamento è troppo forte o il pH è sbagliato.
- Il flusso di caricamento è troppo alto.
- Si è verificato un “breakthrough” perché il carico del campione è troppo alto o la massa del sorbente è troppo bassa.
5. Lavare la cartuccia, raccogliendo ogni frazione di lavaggio.
6. Analizzare nuovamente la frazione per verificare il contenuto di analita. Se l'analita è presente in questa frazione, allora vuol dire che:
- Il solvente di lavaggio è troppo forte.
- Il solvente di lavaggio non è al pH corretto.
7. Se l'analita non è stato trovato nelle frazioni di caricamento o di lavaggio, allora l'analita non viene eluito dalla fase stazionaria:
- Provare ad utilizzare un solvente di eluizione più forte.
- Assicurarsi che il pH del solvente di eluizione sia corretto.
- Se i primi 2 suggerimenti non risolvono il problema allora è necessario provare a utilizzare un sorbente meno ritentivo (se gli analiti sono molto idrofobici provare a sostituire una cartuccia C18 con una C8).
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