HPLC/UHPLC Technischer Tipp
Niveau: Grundlagen
Grundlegende Analyten und die Vorteile modifizierter Siliciumdioxid-Träger in der Umkehrphase
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Siliciumdioxid-basierte stationäre Phasen sind derzeit die am häufigsten verwendeten Phasen in der Flüssigchromatographie. Traditionelle C18-Säulen hatten oft Probleme mit schlechter Peakform und Tailingen von basischen Analyten bei niedrigem pH-Wert sowie begrenzter Stabilität aufgrund langsamer Silanhydrolyse bei hohen pH-Wert. Durch Quervernetzung und Endcapping-Technologien wurden die unerwünschten sekundären Wechselwirkungen und die begrenzte Stabilität von Siliciumdioxid-Trägern erheblich verbessert.
Die jüngste Entwicklung zur Analyse von basischen Analyten bei niedrigen pH-Werten ist die Herstellung von C18-Säulen mit einer verbleibenden positiven Ladung auf dem Siliciumdioxid-Träger. Diese Kombination ermöglicht die Verwendung von 100% wässrigen Bedingungen, was die Retention von basischen Verbindungen verbessert. Sie minimiert auch (ionische) sekundäre Wechselwirkungen zwischen positiv geladenen Basen und Silanolgruppen aufgrund der Ladungsabstoßung an der Kieseloberfläche. Das Ergebnis ist, dass basische Verbindungen mit guter Peakform unter sauren Bedingungen, die allgemein bevorzugt werden, zurückgehalten und eluiert werden können. Abbildung 1 zeigt ein Beispiel für die verbesserte Peakform von Chlorpheniramin, einem basischen Antihistaminikum, unter Verwendung einer Kinetex™ PS C18-Säule mit dieser Technologie.
Abbildung 1. Verbesserte Rückphasenretention und Peakform von Chlorpheniramin mit der Kinetex PS C18-Säule.
Wenn jedoch hohe pH-Werte benötigt werden, wurden neue Hybridmaterialien entwickelt, die die Stabilität von HPLC-Sorbentien bei hohen pH-Werten erheblich verlängern. Diese neue Entwicklung ermöglicht es den Anwendern, hohe pH-Werte zu nutzen, um basische Verbindungen zu deprotonieren, wodurch deren Hydrophobizität (und damit die Retention) erhöht wird und gleichzeitig die Möglichkeit des Ionenaustauschs entfällt. Dieser Ansatz ist besonders nützlich bei der Betrachtung polarer basischer Verbindungen, da die Kombination aus guter Peakform und verbesserter Retention vorteilhaft ist, insbesondere in der LC-MS/MS, wo gezeigt wurde, dass die Elution unter Bedingungen mit höherem organischen Anteil der mobilen Phase vorteilhaft für die Peakantwort ist. Säulen wie Gemini™-NX und Kinetex EVO können im pH-Bereich von 1-12 verwendet werden. Abbildung 2 zeigt die erfolgreiche Analyse von basischen Verbindungen bei pH 8,2 unter Verwendung einer Kinetex EVO C18-Säule mit dieser Technologie.
Basische Verbindungen durch LC/MS unter Verwendung einer mobilen Phase mit hohem pH-Wert
Wir untersuchen die Wirksamkeit der Verwendung von mobilen Phasen mit hohem pH-Wert für die Quantifizierung von basischen Verbindungen in ESI+ LC/MS/MS, indem wir die Nachweisgrenzen (LOD), die Quantifizierungs-grenzen (LOQ), die Linearitätsbereiche, die Präzision und die Genauigkeit vergleichen, die in mobilen Phasen mit hohem und niedrigem pH-Wert beobachtet werden.
Verwendung von pH-LC zur Steuerung der Selektivität von sauren und basischen Verbindungen durch HPLC
Wir untersuchen die Wirksamkeit der Verwendung von pH-LC-Techniken bei der Trennung einer Mischung aus sauren (Naproxen), basischen (Amitriptylin) und neutralen (Toluol) Verbindungen unter Verwendung einer Gemini 5 µm NX-C18-Säule.
Marken
Gemini und Kinetex sind Marken von Phenomenex.
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
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