Wskazówki techniczne HPLC / UHPLC
Poziom: Podstawy
Anality zasadowe a zalety modyfikowanych złóż krzemionkowych w chromatografii cieczowej w układzie RP
Fazy stacjonarne na bazie krzemionki są obecnie najczęściej stosowanymi fazami w chromatografii cieczowej. Tradycyjne kolumny C18 często cierpiały z powodu słabego kształtu piku i ogonowania zasadowych analitów przy niskim pH oraz ograniczonej stabilności z powodu stopniowej hydrolizy na powierzchni przy wysokim pH. Dzięki technologiom sieciowania i zabezpieczania końcowego (endcapping), niepożądane wtórne interakcje krzemionki i ograniczona stabilność zostały znacznie poprawione.
Najnowszym osiągnięciem wprowadzonym do analizy analitów zasadowych przy niskich poziomach pH są kolumny typu C18 z resztkowym ładunkiem dodatnim na nośniku krzemionkowym. Ta kombinacja pozwala na stosowanie w 100% wodnych warunków, zwiększając retencję związków zasadowych. Minimalizuje również (jonowe) wtórne interakcje między dodatnio naładowanymi zasadami i grupami silanolowymi z powodu odpychania ładunku na powierzchni krzemionki. W rezultacie związki zasadowe mogą być zatrzymywane i eluowane z dobrym kształtem piku w warunkach kwaśnych, które są ogólnie preferowane. Rysunek 1 przedstawia przykład polepszonego kształtu piku chlorfeniraminy, zasadowego leku przeciwhistaminowego, przy użyciu kolumny Kinetex™ PS C18 z tą technologią.
Rysunek 1. Zwiększona retencja w układzie faz odwróconych i kształt piku chlorfeniraminy dzięki Kinetex PS C18.
Jednakże, gdy potrzebne jest wysokie pH, wyprodukowano nowe materiały hybrydowe, które znacznie zwiększają stabilność sorbentów HPLC przy wysokim pH. To nowe rozwiązanie pozwala użytkownikom na wykorzystanie wysokiego pH do deprotonowania związków zasadowych, zwiększając ich hydrofobowość (a tym samym retencję), jednocześnie eliminując możliwość wymiany jonowej. Podejście to jest szczególnie przydatne przy rozważaniu polarnych związków zasadowych, ponieważ połączenie dobrego kształtu piku ze zwiększoną retencją jest przydatne, zwłaszcza w LC-MS/MS, gdzie wykazano, że elucja przy wyższej zawartości części organicznej fazy ruchomej jest korzystna dla odpowiedzi detektora. Kolumny takie jak Gemini™-NX i Kinetex EVO mogą być stosowane w zakresie pH 1-12. Rysunek 2 przedstawia udaną analizę związków zasadowych przy pH 8,2 przy użyciu kolumny Kinetex EVO C18 z tą technologią.
Związki zasadowe metodą LC/MS przy użyciu fazy ruchomej o wysokim pH
Zbadaliśmy skuteczność stosowania faz ruchomych o wysokim pH do oznaczania ilościowego związków zasadowych w ESI+ LC/MS/MS poprzez porównanie granic wykrywalności (LOD), granic oznaczalności (LOQ), zakresów liniowości, precyzji i dokładności obserwowanych w fazach ruchomych o wysokim i niskim pH.
Wykorzystanie pH-LC do kontrolowania selektywności związków kwasowych i zasadowych za pomocą HPLC
Zbdaliśmy skuteczność stosowania zmiany pH w rozdzielaniu mieszaniny związków kwasowych (naproksen), zasadowych (amitryptylina) i obojętnych (toluen) przy użyciu kolumny Gemini 5 um NX-C18.
Znaki towarowe
Gemini i Kinetex są znakami towarowymi firmy Phenomenex.
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
CONNECT WITH US
