Astuces techniques sur la préparation d’échantillon
Niveau : débutant
Considérations à prendre en compte lorsque vous utilisez des échantillons solides et la SPE
L'extraction en phase solide est couramment utilisée comme technique de préparation des échantillons avant l'analyse par HPLC et GC. Elle permet de réaliser :
• le nettoyage;
• la pré-concentration de l'analyte;
• le changement de solvant.
Cela fonctionne bien pour tout échantillon liquide homogène, mais il est clair qu'un échantillon solide ne peut pas être chargé directement sur un dispositif SPE. Nous examinerons ici la meilleure façon d'aborder la manipulation des échantillons solides avant la SPE.
La première étape du prétraitement des échantillons consiste à homogénéiser l'échantillon solide avec un solvant approprié. Le solvant choisi à cette fin doit être :
• Efficace pour solubiliser l'analyte.
• Efficace pour solubiliser la matrice de l'échantillon, bien que cela ne soit pas nécessaire à condition que l'échantillon soit bien mélangé au solvant.
• Dans le cas idéal, il s'agira d'un solvant faible par rapport à la SPE. Cela peut ne pas être possible, et il sera alors nécessaire de sécher puis reconstituer l'échantillon avant de le charger sur la cartouche SPE.
Après avoir formé une suspension de l'échantillon dans un solvant approprié, l'échantillon doit être mélangé au vortex pour favoriser un mélange complet, puis centrifugé pour agglomérer les composants insolubles de la matrice. Le solvant doit ensuite être éliminé pour un traitement ultérieur.
À ce stade, le mécanisme de la SPE doit être sélectionné :
Reversed Phase SPE Method
| Mécanisme | Solvant faible | Solvant fort |
|---|---|---|
| Phase inverse | Eau/tamponr | Acétonitrile/Méthanol (le plus fort est l'hexane) |
| Phase normale | Hexane/Heptane | Organique de polarité moyenne comme DCM, MTBE, IPA (le plus fort est l'eau) |
| Échange d'ions | Tampon aqueux à un pH qui favorise les interactions d'échange d'ions entre l'analyte et le sorbant SPE | Solvant organique, généralement du méthanol avec ajustement du pH pour défaire les interactions d'échange d'ions |
Les propriétés de l'analyte et du diluant de l'échantillon doivent tous deux être pris en compte à ce stade. Les extractions en phase inverse sont efficaces pour les analytes modérément polaires à modérément hydrophobes, mais seulement s'ils sont dissous dans un solvant faible comme l'eau. Si l'échantillon est dissous dans un solvant à polarité moyenne, il devra être soit dilué, soit séché et reconstitué. Il en va de même pour la phase normale, où les échantillons doivent être dissous dans de l'hexane/heptane pour que les analytes soient retenus avec succès pendant la charge de l'échantillon sur le dispositif SPE.
Ces exemples devraient illustrer ce concept.
1) L'extraction des PCB du sol.
Les PCBs sont hydrophobes et se dissolvent facilement dans un solvant non polaire. Le sol peut être séché, pesé et ensuite extrait à l'aide d'hexane (ou d'heptane). Une fois bien mélangée et centrifugée, la solution résultante peut être appliquée directement sur un tube SPE en silice conditionnée, ce qui permet de procéder à une extraction en phase normale.
2) Tylosine dans la viande.
La tylosine est un antibiotique, avec un log P de 1,0. L'extraction de la tylosine de la viande en utilisant un mélange d'acétonitrile et d'eau (80:20) permet de rompre toute interaction hydrophobe en libérant la tylosine. Après centrifugation, l'échantillon liquide obtenu devra être dilué davantage avec de l'eau pour réduire la force du solvant de charge avant de procéder à une extraction en phase inverse.
3) Enilconazole dans les oranges.
L'enilconazole est un fongicide largement utilisé en agriculture et il est souvent utilisé avec les agrumes. Il peut facilement être extrait des oranges à l'aide de l'acétonitrile. L'énilconazole étant basique, l'ajout de HCl à l'extrait d'acétonitrile favorise la protonation de l'analyte, ce qui permet de le retenir directement sur un sorbant SPE à échange fort de cations. Cela simplifie grandement le processus d'extraction car aucune dilution de l'échantillon n'est nécessaire (contrairement à l'extraction en phase inverse, ou en phase normale, où l'acétonitrile à 100% entraînerait la non-rétention de l'analyte pendant l'étape de charge).
Pour plus de conseils ou suggestions concernant la préparation des échantillons, veuillez consulter le site www.phenomenex.com/techniques/solid-phase-extraction
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