Wskazówki techniczne HPLC / UHPLC
Poziom: Podstawy
Zanieczyszczenie kolumny – co się dzieje i jak go uniknąć
Jedną z najczęstszych przyczyn krótkiego czasu życia kolumny jest kontaminacja, często skutkująca wysokim ciśnieniem wstecznym i tzw. "zatkaniem" sitka (fryty) wlotowego.
Ta wskazówka techniczna ma na celu wyjaśnienie, co się dzieje, a także jak można uniknąć kontaminacji kolumny.
Podczas produkcji kolumn HPLC i UHPLC, do zabezpieczenia kolumny przed niepożądanymi substancjami i zatrzymania upakowanego materiału HPLC, używane są sitka. Są to dyski z porowatego metalu o porowatości zazwyczaj 0,5, 1,0 lub 2,0 µm. Jeśli próbki zawierają nierozpuszczone substancje, zostaną one przefiltrowane z przepływającego rozpuszczalnika, osadzając się na zewnętrznej stronie sitka wlotowego. W miarę trwania tego procesu ilość sitka dostępnego do przepływu rozpuszczalnika maleje, ograniczając przepływ fazy ruchomej, co z kolei zwiększa ciśnienie wsteczne. W końcu staje się niemożliwe przepchanie rozpuszczalnika przez sitko, a pompa HPLC się wyłącza.
Tego procesu można uniknąć, przefiltrowując próbki przed zadozowaniem ich do systemu HPLC. Zazwyczaj zaleca się stosowanie filtrów strzykawkowy o porowatości 0,45 µm do próbek, które będą analizowane na kolumnach z wypełnieniem 5 µm wielkości ziarna, a filtrów o porowatości 0,2 µm do kolumn z wypełnieniem 3 µm i mniejszym. Należy jednak pamiętać, że rozpuszczalnik próbki powinien być dopasowany do fazy ruchomej. Jeśli nie jest, istnieje ryzyko, że niektóre składniki próbki będą rozpuszczalne w rozpuszczalniku próbki, co pozwoli im przejść przez filtr strzykawkowy. Po przeniesieniu ich do fazy ruchomej mogą one wytrącać się, powodując zatknięcie sitka. Można temu zapobiec poprzez rozpuszczenie próbki w fazie ruchomej lub zainstalowanie dodatkowego sitka lub systemu ochronnego w postaci przedkolumn jako urządzenia poświęconego zapobiegnięciu zabrudzenia wlotu kolumny.
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
CONNECT WITH US
