Suggerimento tecnico HPLC/UHPLC
Livello: Base
Contaminazione della colonna: perchè accade e come evitarla
La scarsa durata di una colonna LC è spesso legata a fenomeni di contaminazione, che spesso si manifestano con l'aumento della contropressione dovuta all'ostruzione del frit.
Questo suggerimento tecnico cerca di spiegare cosa accade e cosa si può fare per contenere tale fenomeno.
L'impaccamento sia di colonne per HPLC che UHPLC prevede l'utilizzo di frits, sia in testa che in coda alla colonna, che servono a mantenere la densità di impaccamento desiderata ed evitare che corpi estranei (particolato) entrino in colonna. I frits sono generalmente dischi di metallo con porosità di 0,5, 1.0 o 2,0 µm. Se i campioni contengono del materiale insolubile, questo verrà trattenuto dal frit. Con il progressivo accumulo del particolato, la superfice libera del frit tenderà a diminuire sensibilmente, impedendo il passaggio della fase mobile e determinando un aumento della contropressione osservata. Se l’ostruzione è importante, questa potrà determinare il blocco strumentale a causa della pressione troppo elevata.
Questo processo può essere evitato filtrando i campioni e le fasi mobili prima dell'iniezione nel sistema HPLC. Per questo motivo, utilizzando colonne 5 µm è consigliabile filtrare i campioni con filtri siringa di porosità 0,45 µm; per colonne con dimensione di particelle uguali e/o inferiori ai 3 µm, consigliamo di filtrare i campioni con filtri da 0,2 µm. La fase mobile potrà essere filtrata mediante un sistema da vuoto in pochi minuti utilizzando un'opportuna membrana . Particolare attenzione deve essere prestata alla miscibilità tra fase mobile organica, fase mobile acquosa e campione. Se non fossero compatibili, è possibile che alcuni componenti precipitino al momento dell’iniezione, nonostante la preliminare filtrazione delle componeneti, causando l'ostruzione del frit. E’ possibile evitare questo pericolo dissolvendo il campione in fase mobile, installando un filtro in linea o utilizzando un sistema di protezione a cartuccia direttamente sulla colonna LC.
In alternativa, puoi utilizzare questo strumento web che ti aiuterà a scegliere il sistema di protezione adeguato.
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