Astuce technique HPLC/UHPLC
Niveau : débutant
Contamination de la colonne – ce qui se passe et comment cela peut être évité
L'une des causes les plus fréquentes de la réduction de la durée de vie des colonnes est la contamination de la colonne, qui se traduit souvent par une forte contre-pression et un fritté d'entrée "bouché".
Cette astuce technique vise à expliquer comment éviter la contamination des colonnes.
Lors de la fabrication des colonnes HPLC et UHPLC, des frittés sont utilisés pour empêcher les contaminants de pénétrer dans la colonne et empêcher le matériau de remplissage HPLC de la quitter. Ces frittés sont des disques de métal poreux, d'une porosité généralement comprise entre 0,5, 1,0 ou 2,0 µm. Si les échantillons contiennent des matières non dissoutes, celles-ci seront filtrées hors du flux de phase mobile, et resteront sur la partie extérieure du fritté d'entrée. Au fur et à mesure des injections, la surface de fritté disponible pour le passage de la phase mobile diminue, ce qui limite le flux de la phase mobile et augmente la contre-pression. Finalement, il devient impossible de faire passer le solvant à travers le fritté et la pompe HPLC s'arrête.
Ce processus peut être évité par la filtration des échantillons avant leur injection dans le système HPLC. Il est généralement conseillé d'utiliser des filtres seringue de porosité 0,45 µm pour les échantillons qui seront injectés sur des colonnes de 5 µm, et des filtres de porosité 0,2 µm pour des colonnes de granulométrie <3 µm. Il faut faire attention car, dans l'idéal, le diluant de l'échantillon doit correspondre à la phase mobile. Si ce n'est pas le cas, il se peut que certains composants de l'échantillon, solubles dans le diluant, passent à travers le filtre seringue. Lorsqu'ils sont injectés dans la phase mobile, ils peuvent précipiter en provoquant un bouchage du fritté. Ceci peut être évité soit en dissolvant l'échantillon dans la phase mobile, soit en installant un fritté d'entrée ou une colonne de garde en amont pour empêcher l'encrassement de la tête de colonne.
Pour vous aider, vous pouvez utiliser cet outil web qui vous guidera dans la sélection des cartouches de garde.
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