HPLC/UHPLC Technischer Tipp
Niveau: Grundlagen
Kontamination der Säule – was geschieht und wie es vermieden werden kann
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Eine der häufigsten Ursachen für eine kurze Säulenlebensdauer ist die Kontamination der Säule, die oft zu einem hohen Gegendruck und einer so genannten "verstopften" Einlass-Fritte führt.
Dieser technische Tipp erklärt, wie eine Kontamination der Säule vermieden werden kann.
Bei der Herstellung von partikelbasierten HPLC- und UHPLC-Säulen werden Fritten verwendet, um zu verhindern, dass Fremdmaterial in die Säule gelangt und das HPLC-Packungsmaterial die Säule verlässt. Diese Fritten sind Scheiben aus porösem Metall, die im Allgemeinen eine Porosität von 0,5, 1,0 oder 2,0 µm aufweisen. Wenn Proben nicht gelöste Bestandteile enthalten, werden dieses aus dem Lösungsmittelstrom der mobilen Phase gefiltert und sitzen auf der Außenseite der Einlass-Fritte. Im weiteren Verlauf dieses Verstopfungsprozesses wird die Fläche der Fritte, die für den Durchgang der mobilen Phase verfügbar ist, kleiner. Dadurch wird der Fluss der mobilen Phase eingeschränkt, was wiederum den Gegendruck erhöht. Schließlich wird es unmöglich, Lösungsmittel durch die Fritte zu drücken, und die HPLC-Pumpe schaltet sich ab.
Dieser Prozess kann durch die Filtration der Proben vor der Injektion in das HPLC-System verhindert werden. Im Allgemeinen wird empfohlen, Spritzenfilter mit einer Porosität von 0,45 µm für Proben zu verwenden, die auf 5 µm-Säulen analysiert werden. Für Säulen mit 3 µm und noch kleineren Partikeln sollte man Spritzenfilter mit einer Porosität von 0,2 µm einsetzen. Es sollte darauf geachtet werden, dass das Probenlösungsmittel idealerweise zur mobilen Phase passt. Wenn dies nicht der Fall ist, kann es sein, dass einige Probenkomponenten im Probenlösungsmittel löslich sind und so den Spritzenfilter passieren können. Wenn sie dann in die mobile Phase injiziert werden, können sie ausfallen und eine Frittenblockade verursachen. Dies kann vermieden werden, indem man entweder die Probe in der mobilen Phase löst oder alternativ einen Inline-Filter oder eine Vorsäulenkartusche als „Opfereinrichtung“ installiert, um ein Verschmutzen des Säuleneinlasses zu verhindern.
Alternativ dazu haben wir dieses Web-Tool, das Sie bei der Auswahl der richtigen Vorsäulenkartusche unterstützt.
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