Se stai lavorando con un metodo noto e validato, ti consigliamo di:
- Controllare tutte le soluzioni utilizzate per il metodo SPE per assicurarsi che nulla sia stato preparato o usato in modo errato
- Verificare che il flusso non sia troppo alto durante il caricamento o l’eluizione.
- Non asciugare le cartucce tra la fase di caricamento ed eluizione
Generalmente la soluzione più veloce per risolvere il problema è ripetere l'estrazione dopo aver seguito i suggerimenti sopra descritti.
Se invece si sta sviluppando un nuovo metodo, sarà necessario trovare in quale passaggio si perde l’analita. La prima cosa che consigliamo è di preparare una soluzione dello standard senza matrice (da utilizzare come campione ideale). Quindi applicare il metodo per il campione:
- Condizionare la cartuccia
- Equilibrare la cartuccia
- Caricare il campione, raccogliendo ciò che eluisce durante la fase di caricamento. In questo eluato va ricercato l’analita. La sua presenza può indicare che:
- Il solvente di caricamento è troppo forte o il pH non è corretto
- Il flusso di caricamento è troppo alto
- La quantità di campione caricata è troppo elevata, o la massa sorbente è troppo piccola .
Se l'analita non si trova nell’eluato della fase di caricamento, procedere alla fase di lavaggio.
- Lavare la cartuccia, raccogliendo l’eluato della frazione di lavaggio, e ricercare in tale frazione l’analita. La presenza di analita può essere dovuta a :
- Solvente di lavaggio troppo forte o ad un pH non corretto
- Se l'analita non è stato trovato nelle frazioni di carico o di lavaggio, allora è trattenuto dalla fase sorbente. Per eluirlo si può:
- Provare a usare un solvente di eluizione più forte
- Controllare che il pH del solvente di eluizione sia corretto
- Se i primi due suggerimenti non risolvono il problema, si può provare ad usare un sorbente meno ritentivo. Ad esempio se stiamo lavorando in fase inversa si può provare ad utilizzare una fase C8 al posto di una C18 se gli analiti sono molto idrofobi.
