Astuces techniques sur la préparation d’échantillon
Niveau : Intermédiaire
Troubleshooting SPE
Cette astuce technique explore certains problèmes rencontrés avec l'extraction en phase solide et en particulier la récupération des analytes. La récupération se rapporte au pourcentage d'analyte capturé et récupéré par la SPE. Quelques autres termes couramment utilisés en relation avec la récupération, qui peuvent être d'intérêt, sont :
Récupération relative : Détermination indirecte de la capture et de la récupération de l´analyte effectuée lors du processus d'extraction basé sur la récupération d'un étalon interne (ayant une structure similaire à l'analyte cible) qui est ajouté à l'échantillon avant de la procédure d'extraction proprement dite.
Récupération absolue : Méthode quantitative pour la détermination de la quantité réelle d'analyte capturé et récupéré durant le processus d'extraction. La récupération de la substance à analyser est basée sur un étalon externe qui est ajouté à l'éluant à la fin de la procédure d'extraction (au lieu d'être basé sur un étalon interne qui est co-extrait avec l'analyte).
SYMPTÔME
La récupération de l'analyte est inférieure à 100%.
INDICATION
L'analyse de la fraction non retenue (volume mort) indique la présence de l'analyte dans cette fraction.
PROBLÈME
L'analyte ne se lie pas de manière quantitative lors de l'étape de charge d'échantillon.
| Cause | Solutions / Suggestions |
|---|---|
| A. Le conditionnement de la colonne est impropre, incorrect, ou non optimal. | 1. Conditionner la colonne en utilisant du méthanol ou de l’isopropanol. 2. Utiliser une quantité suffisante de méthanol ou d’isopropanol de manière à mouiller tout le lit sorbant ; faire percoler lentement plus de deux volumes de colonne sous un faible vide. 3. Suite au méthanol et à l´isopropanol, faire percoler un volume de colonne d’une solution de composition similaire à celle de l’échantillon actuel (pH ajusté) mais sans l’analyte(s). 4. Ne pas utiliser trop de ce deuxième « solvant de conditionnement » au point 3 ci-dessus. De plus, ne pas le laisser dans la colonne pendant trop longtemps. 5. Ne pas trop sécher la colonne pendant ou après son conditionnement (utiliser un faible vide pendant ~ 1 minute). |
| B. L’échantillon/la matrice se trouve dans (ou contient) un solvant “trop fort”. | 1. Diluer l´échantillon dans un solvant plus “faible” pour favoriser les liaisons (moins polaire pour la phase normale, plus polaire pour la
phase inverse, moins de sel, tampons et/ou ajustement du pH pour l’échange d’ions). 2. Augmenter la dilution de l'échantillon avec un solvant "faible". 3. Charger une quantité inférieure d´échantillon. 4. Augmenter la masse de sorbant. 5. Diminuer le débit pendant la charge des échantillons. 6. Utilisez un sorbant " plus fort" avec une plus grande affinité pour l'analyte. 7. Ajouter un modificateur organique (ou ajuster le pH) pour améliorer l'affinité de liaison de l'analyte (ou des analytes). 8. Ajuster le pH de l'échantillon de sorte que l'analyte soit neutre pour la phase inverse et chargé pour l´échange d'ions. 9. Ajouter du sel (de 5 à 10% de NaCl) afin d'augmenter la polarité du solvant et d'améliorer la rétention des analytes très polaires en phase inverse. 10. Ajouter un réactif pair d'ions pour améliorer la liaison des analytes chargés en phase inverse. |
| C. «Surcharge de masse» sur la colonne (la colonne est trop petite et / ou la masse totale des solutés / composants liés est trop grande). | 1. Diminuer le volume de charge de l'échantillon. 2. Augmenter la masse de sorbant. 3. Utiliser un sorbant avec une plus grande surface spécifique. 4. Utilisez un sorbant "plus fort". 5. Diminuer le débit pendant la charge (pour améliorer la «diffusion»). 6. Diminuer le diamètre intérieur de la colonne, mais utiliser la même masse de sorbant (pour augmenter la chute de pression, réduire le débit et améliorer la «diffusion»). 7.Diluer l'échantillon dans un solvant "plus faible" pour améliorer la capacité. |
| D. Le débit est trop élevé lors de l'étape de charge de l’échantillon. | 1. Diminuer le débit pendant la charge. 2. Augmenter la masse de sorbant. 3. Diminuer le diamètre intérieur de la colonne pour réduire le débit. 4. Utiliser un sorbant avec une plus grande surface spécifique. |
| E. Le sorbant est "trop faible" (il a une affinité insuffisante ou trop faible pour l´analyte relatif à l'échantillon / la matrice et / ou le solvant de dilution). | 1. Changer pour un sorbant "plus fort", avec une densité de ligand plus élevé ; basculer d’un sorbant non-endcapped vers un sorbant endcapped (ou vice versa). 2. Voir les solutions / suggestions pour la cause C ("surcharge de masse » sur la colonne) ci-dessus. 3. Voir les solutions / suggestions pour la cause B (L’échantillon/la matrice se trouve dans (ou contient) un solvant “trop fort”) ci-dessus. |
| F. Le solvant de conditionnement est “lavé/emporté” par un volume d’échantillon trop grand. | 1. Ajouter 2% de méthanol ou d'isopropanol à l'échantillon afin d'éviter l'effondrement de la chaîne alkyle lors de l'étape de charge de l’échantillon. |
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