Wskazówka techniczna dotycząca przygotowania próbki
Poziom: Średnio zaawansowany
Rozwiązywanie problemów z SPE
W tej wskazówce technicznej omówiono niektóre problemy związane z ekstrakcją do fazy stałej, a w szczególności z odzyskiem analitu. Odzysk odnosi się do procentu analitu wychwyconego i odzyskanego przez SPE. Kilka innych powszechnie używanych terminów związanych z odzyskiem, które mogą być interesujące to:
Odzysk względny: Pośrednie określenie wychwytywania i odzyskiwania analitu podczas procesu ekstrakcji w oparciu o odzysk wzorca wewnętrznego (który jest związkiem o strukturze podobnej do analitu docelowego), który jest dodawany do surowej próbki/matrycy przed właściwą procedurą ekstrakcji.
Odzysk bezwzględny: Ilościowa metoda określania rzeczywistej ilości analitu wychwyconego i odzyskanego podczas procesu ekstrakcji. Odzysk analitu opiera się na zewnętrznym standardzie, który jest dodawany do eluentu na końcu procedury ekstrakcji (a nie na wewnętrznym standardzie, który jest współekstrahowany z analitem).
Objaw
Odzysk analitu jest niższy niż 100%.
Wskazówka
Analiza niezatrzymanej frakcji (objętości pustej kolumienki) wskazuje, że analit jest obecny w "przepływie" i nie został zatrzymany.
Problem
Wiązanie analitu nie jest ilościowe podczas etapu ładowania próbki.
| Przyczyna | Rozwiązania/sugestie |
|---|---|
| A. Kondycjonowanie kolumny jest niewłaściwe, nieprawidłowe lub niezoptymalizowane. | 1. Kondycjonuj kolumnę metanolem lub izopropanolem. 2. Użyj wystarczającej ilości metanolu lub izopropanolu, aby zwilżyć całe złoże sorbentu; pozwól, aby więcej niż dwie objętości kolumienki przesączyły się powoli pod niską próżnią. 3. Następnie nanieś jedną objętością kolumny roztworu o składzie podobnym do rzeczywistej próbki (dostosowanym pH), ale bez analitu(ów). 4. Nie używaj zbyt dużej ilości tego drugiego "rozpuszczalnika kondycjonującego" z sekcji 3, ani nie pozwól mu pozostać w kolumnie zbyt długo. 5. Nie osuszaj kolumienki w trakcie lub po kondycjonowaniu (stosować niską próżnię przez ~1 minutę). |
| B. Próbka/matryca znajduje się w (lub zawiera) rozpuszczalniku, który jest „zbyt silny”. | 1. Rozcieńczyć próbkę w „słabszym” rozpuszczalniku/roztworze w celu promowania wiązania analitu (mniej polarny dla fazy normalnej, bardziej polarny dla fazy odwróconej, mniej soli, buforowany i/lub o pH dostosowanym do wymiany jonowej). 2. Zwiększyć rozcieńczenie próbki za pomocą „słabego” rozpuszczalnika. 3. Załaduj mniej próbki. 4. Zwiększ masę sorbentu. 5. Zmniejszyć szybkość przepływu podczas ładowania próbki. 6. Użyj "silniejszego" sorbentu o wyższym powinowactwie do analitu. 7. Dodaj rozpuszczalnik organiczny (lub dostosuj pH), aby zwiększyć powinowactwo wiązania analitu(ów). 8. Dostosuj pH próbki tak, aby analit był neutralny w przypadku fazy odwróconej lub naładowany w przypadku wymiany jonowej. 9. Dodaj sól (5 do 10% NaCl) w celu zwiększenia polarności rozpuszczalnika i zwiększenia retencji wysoce polarnych analitów w fazie odwróconej. 10. Dodaj odczynnik pary jonowej w celu zwiększenia wiązania naładowanych analitów w fazie odwróconej. |
| C. Przeładowanie kolumny (masa kolumienki jest zbyt mała i/lub całkowita masa związanych substancji rozpuszczonych/składników jest zbyt duża). | 1. Zmniejsz objętość załadowanej próbki. 2. Zwiększ masę sorbentu. 3. Użyj sorbentu o większej powierzchni. 4. Użyj "silniejszego" sorbentu. 5. Zmniejsz natężenia przepływu podczas ładowania (w celu zwiększenia "dyfuzji"). 6. Zmniejsz średnicę wewnętrzną kolumny, ale użyć tej samej masy sorbentu (aby zwiększyć spadek ciśnienia, zmniejszyć przepływ i zwiększyć "dyfuzję"). 7. Rozcieńcz próbkę w "słabszym" rozpuszczalniku w celu zwiększenia pojemności. |
| D. Natężenie przepływu jest zbyt wysokie podczas etapu ładowania próbki. | 1. Zmniejsz natężenie przepływu podczas ładowania 2. Zwiększ masę sorbentu. 3. Zmniejsz średnicę wewnętrzną kolumny, aby zmniejszyć przepływ. 4. Użyj sorbentu o większej powierzchni. |
| E. Sorbent jest "za słaby" (ma słabe lub niskie powinowactwo do analitu w stosunku do próbki/matrycy i/lub rozpuszczalnika rozcieńczającego). | 1. Zmień na "silniejszy" sorbent, na taki o większej gęstości ligandu, z sorbentu bez endcapping’u na sorbent z endcapping’iem (lub odwrotnie). 2. Patrz "Rozwiązania/Sugestie" dla Przyczyny C ("Przeładowanie kolumny..."). 3. Patrz Rozwiązania/Sugestie dla Przyczyny B ("Próbka/matryca jest w (lub zawiera) rozpuszczalniku, który jest "zbyt silny"")j. |
| F. Rozpuszczalnik kondycjonujący jest "wypłukiwany" przy dużych objętościach próbki. | 1. Dodać 2% metanolu lub izopropanolu do próbki, aby zapobiec „zapadaniu się” łańcucha alkilowego podczas etapu ładowania wodnej próbki. |
Rozwiązania do ekstrakcji do fazy stałej (SPE) firmy Phenomenex, w tym kolumienki i płytki 96-dołkowe, dokumentacja techniczna, ceny i oferty specjalne.
Znak towarowy
Strata jest znakiem towarowym firmy Phenomenex.
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
CONNECT WITH US
