Wskazówki techniczne HPLC / UHPLC
Poziom: Podstawy
Rola End-Capping’u w RP
Krzemionka stosowana do wypełniania kolumn HPLC jest polimerem krzemu i tlenu z grupami Si-OH (silanolami) na powierzchni. Do tych silanoli są wiązane grupy funkcyjne za pomocą odpowiedniej silanowej pochodnej, w celu modyfikacji podłoża.
Gdy złoże jest modyfikowane, niemożliwe jest zapewnienie 100% pokrycia powierzchni i przereagowanie wszystkich dostępnych grup silanolowych (obecność wolnych grup hydroksylowych na powierzchni krzemionki). Gdy zaczynasz wiązać fazę stacjonarną, pojawia się zawada przestrzenna, przez co kolejne etapy wiązania są trudniejsze niż poprzednie.
Bez pokrycia powierzchni złoże pozostawałaby ze znaczną liczbą dostępnych, wysoce aktywnych resztkowych silanoli, które mogą potencjalnie zmieniać selektywność fazy stacjonarnej. Te resztkowe grupy mają potencjał do tworzenia silnych oddziaływań jonowych i polarnych (często nazywanych „oddziaływaniami drugorzędowymi”) z grupami polarnymi i zasadowymi obecnymi w strukturze analitu. Tak więc, zmniejszenie liczby wolnych silanoli po związaniu fazy stacjonarnej poprzez end-capping jest niezbędne.
Historycznie, zabezpieczenie wolnych silanoli wykonywano za pomocą małej grupy hydrofobowej, podobnej w naturze do trimetylosilanu. W ostatnich latach kilku producentów wprowadziło również inne grupy, aby dodać inny element selektywności do kolumny.
TMS end-capping
Jeśli odczynnik stosowany do zabezpieczenia silanoli zawiera naładowaną grupę funkcyjną, do standardowych oddziaływań fazy odwróconej z ligandami C18, zostaną dołączone dodatkowe właściwości jonowymienne. Podobnie, polarna grupa nada powierzchni właściwości polarne.
Teraz, gdy zrozumieliśmy rolę end-cappingu, przyjrzyjmy się głównym zaletom różnego rodzaju end-cappingu w zależności od zastosowanych grup chemicznych.
| Typ fazy stacjonarnej | End-capping | Korzyści |
|---|---|---|
| C18 | Grupa trimetylosililowa | |
| PS-C18 | Dodatnio naładowana grupa i grupa trimetylosililowa | |
| Polar C18 | Grupa polarna i grupa trimetylosililowa | |
| XB-C18 | Di-izobutylowe łańcuchy boczne i grupa trimetylosililowa |
Podsumowując, nowe technologie end-cappingu mogą znacznie poprawić analizę związków, które kiedyś były uważane za trudne. Na przykład, obecnie można osiągnąć doskonały kształt piku i krótsze czasy pracy w analizie podstawowych leków przy użyciu kolumn PS-C18. Udowodniono, że chemia Polar C18 najlepiej zatrzymuje związki, takie jak metabolity, a chemia XB-C18 wykazała doskonałe wyniki do analizy peptydów, ze zwiększoną retencją małych polarnych peptydów.
Rozwiązywanie problemów LC
• Problemy z chromatogramem i dozowaniem próbki
• Kluczowe obszary problematyczne i konserwacja zapobiegawcza
• Wycieki i nieprawidłowe ciśnienie
Bezpłatne, na żądanie, seminaria internetowe na temat chromatografii
• Podstawy LC
• Rozwiązywanie problemów z LC
• Optymalizacja systemu LC
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
CONNECT WITH US
