Suggerimento tecnico HPLC/UHPLC
Livello: Base
L'effetto dell'end-capping in fase inversa
La silice utilizzata per impaccare colonne LC è un polimero con gruppi Si-OH (silanoli) sulla superficie. Questi silanoli sono utilizzati per legare specifici gruppi funzionali nel processo di derivatizzazione.
Quando le colonne LC sono funzionalizzate è impossibile assicurare che tutti i silanoli
vengano derivatizzati con i gruppi funzionali desiderati. Più il processo di
derivatizzazione avanza, maggiore sarà l'ingombro sterico della fase stazionaria
legata, più sarà difficile raggiungere i restanti silanoli liberi per derivatizzarli.
In assenza di un processo di end-capping, la fase stazionaria avrebbe comunque un numero significativo di silanoli liberi in grado di modificare la selettività complessiva della colonna. I silanoli liberi possono dar vita a interazioni ioniche e polari, in particolare con compositi basici. Per questo motivo è assolutamente necessario ridurre il numero dei silanoli liberi dopo la derivatizzazione.
Storicamente, l'end-capping è fatto con piccoli gruppi idrofobici, come il trimetil-silano
(TMS). Negli ultimi anni i produttori hanno introdotto molti altri gruppi funzionali che
TMS end-capping
Se il reagente utilizzato per l’end-capping contiene gruppi funzionali carichi, la colonna viene modifcata introducendo proprietà di scambio ionico che si sommano alle interazioni idrofobiche del residuo alchilico C18. Allo stesso modo, il gruppo polare conferirà caratteristiche polari alla superficie.
Ora che abbiamo compreso il ruolo dell'end-capping, facciamo un riassunto dei principali vantaggi della silice modificata e dei gruppi chimici utilizzati.
| Tipi di fase stazionaria | End-capping | Vantaggi |
|---|---|---|
| C18 | Trimetil-silil | |
| PS-C18 | Gruppi polari carichi e trimetil-silil | |
| Polar C18 | Gruppi polari neutri e trimetil-silil | |
| XB-C18 | Catene laterali isobutiliche e trimetil-silil |
In sintesi, le nuove tecnologie di “end-capping” possono migliorare significativamente l'analisi di composti che un tempo venivano considerati difficili. Ad esempio, utilizzando colonne con selettività PS-C18 oggi è possibile ottenere una forma di picco ottimale e tempi di analisi ridotti per l'analisi di farmaci basici. La chimica delle colonne Polar C18 si è dimostrata essere la migliore per ritenere composti ad ampio range di polarità come i metaboliti, mentre la chimica XB-C18 ha mostrato un'eccellente cromatografia per l'analisi dei peptidi, con un miglioramento della ritenzione dei piccoli peptidi polari.
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