Astuces techniques sur la préparation d’échantillon
Niveau : débutant
Quelle quantité d'échantillon puis-je charger sur mon dispositif SPE ? Est-elle liée à la concentration de l'analyte cible ?
Lorsque l'on considère la masse de sorbant nécessaire pour effectuer une extraction en phase solide, il est essentiel de tenir compte de la matrice de l'échantillon (sérum, plasma, urine, salive, aliments, eau de rivière, sol). Cette information vous permettra, à l'aide d'une table de consultation appropriée, de déterminer quelle masse de sorbant SPE il faut utiliser. Les tableaux sont produits pour refléter les niveaux relatifs de matériel endogène interférant présent dans les échantillons. Le dispositif SPE doit avoir une capacité suffisante pour retenir tous les analytes cibles ainsi que toute matière endogène capable de se fixer sur le sorbant avec le même type d'interactions que l'analyte. Si le sorbant est insuffisant, il est possible qu'une partie de l'analyte passe sans être retenue dans le dispositif SPE pendant la charge de l'échantillon, ce qui entraîne des récupérations plus faibles et une perte de reproductibilité de la récupération entre les échantillons.
Volume d’échantillon
Détermine la masse du lit/les volumes de solvant
| Phase Strata | Masse du sorbant | Plasma/ Sérum/ Sang | Urine | Salive | Homogénats de tissus | Eau (sans particules) | Aliments / Matériel végétal | Sol |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Matériaux polymériques | ||||||||
| X, X-C, X-CW, X-A, X-AW | 10 mg | 100 µl | 250 µl | 250 µl | 20 mg | 20 ml | 100 mg | 2 g |
| 30 mg | 250 µl | 1 ml | 1 ml | 50 mg | 60 ml | 300 mg | 6 g | |
| 60 mg | 500 µl | 2 ml | 2 ml | 100 mg | 120 ml | 600 mg | 12 g | |
| 100 mg | 1 ml | 4 ml | 4 ml | 200 mg | 200 ml | 1 g | 20 g | |
| 200 mg | 2 ml | 8 ml | 350 mg | 400 ml | 2 g | 40 g | ||
| 500 mg | 5 ml | 20 ml | 1 g | 1 l | 5 g | 100 g | ||
| 1 g | 2 g | 2 l | 10 g | 200 g | ||||
| 2 g | 4 g | 4 l | 20 g | 400 g | ||||
| Matériaux en silice | ||||||||
| Si-1, C18-E, C18-U, C8, NH2, etc. | 25 mg | 100 µl | 250 µl | 250 µl | 20 ml | 25 ml | 125 mg | 2,5 g |
| 50 mg | 250 µl | 500 µl | 500 µl | 50 mg | 50 ml | 250 mg | 5 g | |
| 100 mg | 500 µl | 2 ml | 2 ml | 100 mg | 100 ml | 500 mg | 10 g | |
| 200 mg | 1 ml | 4 mL | 4 ml | 200 mg | 200 ml | 1 g | 20 g | |
| 500 mg | 2 ml | 8 ml | 500 mg | 500 ml | 2,5 g | 50 g | ||
| 1 g | 5 ml | 20 ml | 1 g | 1 l | 5 g | 100 g | ||
| 2 g | 2 g | 2 l | 10 g | 200 g | ||||
| 5 g | 5 g | 5 l | 20 g | 500 g | ||||
| 10 g | 10 g | 50 g | ||||||
Capacités de charge génériques :
Matériau polymérique : 10 - 15% de la masse totale du lit | Silice : 5% de la masse totale du lit
Si nous comparons le plasma et l'urine, nous pouvons charger 500 µl de plasma sur un sorbant polymérique de 60 mg tel que Strata™-X. En utilisant le même tube SPE de 60 mg, on peut charger 2 ml d'urine, ce qui indique que l'urine contient beaucoup moins de matériel endogène que le plasma.
Pour les types d'échantillons non inclus dans le tableau, il est conseillé d'utiliser la capacité de charge générique, 5% de la masse du sorbant pour les matériaux en silice, ou 10-15% pour les matériaux polymériques. La différence entre la capacité de charge du sorbant polymérique ou en silice est une fonction de la surface, qui est plus élevée pour les matériaux polymériques, ainsi que la densité des ligands - toute la surface d'un matériau polymérique constitue essentiellement la phase stationnaire, tandis que sur un matériau en silice, seule la phase liée à la silice participe au mécanisme d'extraction pour les extractions en phase inverse ou par échange d'ions.
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
CONNECT WITH US
