Optimisation du système LC pour obtenir des performances UHPLC quel que soit le système HPLC

La méthode HPLC - Pourquoi est-elle importante ?

Les améliorations techniques proposées ci-dessous permettent d’optimiser les performances pour toutes vos séparations. Lorsque vous utilisez des colonnes core-shell, les suggestions suivantes vous permettent d’améliorer considérablement les performances de votre méthode.

Les méthodes HPLC doivent d'abord permettre de focaliser l'échantillon en tête de la colonne, puis de minimiser la dispersion de l'échantillon dans la colonne. Lorsque vous minimisez l'élargissement de la bande en réduisant la dispersion de l'échantillon, vous améliorez la sensibilité et la résolution de votre pic.

L'ajout dans la méthode d'une simple programmation de l’injecteur peut minimiser le volume extra colonne pour améliorer la forme et l'efficacité des pics, en particulier pour les séparations LC rapides.

Problème : tous les pics sont larges

1. Vérifier le volume de l'échantillon : Des erreurs dans le chargement de l'échantillon peuvent annuler le gain de performance fourni par la particule core-shell. Si l'échantillon est injecté dans un solvant de composition identique à la phase mobile en mode isocratique, la bande d’élution initiale sur la colonne sera directement proportionnelle au volume d'injection. Pour cette raison, un grand volume d’échantillon injecté sur la colonne va correspondre à une large bande d’élution sur la colonne (faible efficacité).

Solution : Pour réduire la perte d'efficacité des injections larges volumes, il est possible de pré-concentrer l’échantillon en tête de colonne en utilisant un solvant de dilution plus faible que la phase mobile. Vous pouvez également réduire le volume d'injection de votre échantillon. Lorsque des colonnes à haute efficacité sont utilisées, des quantités d'échantillons plus faibles sont souvent nécessaires pour obtenir une bonne réponse du signal.

2. Vérifier le diluant de l’échantillon : Si la force organique du diluant est supérieure à celle de la phase mobile HPLC, la bande d’élution de l'échantillon va se diffuser en tête de la colonne HPLC. Cela peut se produire aussi bien avec les méthodes isocratiques que gradient et annuler une grande partie des gains de performance fournis par la colonne.

• Les méthodes utilisant un gradient où l'échantillon est injecté dans des diluants plus forts peuvent entraîner un élargissement et une division des pics.
• Les méthodes isocratiques où le diluant est plus fort que la phase mobile entraîneront une dispersion excessive de l'échantillon.

Solution : Injecter dans un solvant faible. Il est préférable d'utiliser un diluant plus faible ou ayant la même force organique de la phase mobile afin que l'échantillon se concentre en tête de colonne, ce qui améliore la finesse des pics (c'est-à-dire, augmente l’efficacité).

Objectif : Meilleures capacités de pics et temps d’analyse réduit pour les séparations en mode gradient

Vérifier la programmation de l'injecteur : Le volume extra-colonne en tête de la colonne provoquera la dispersion de l'échantillon dans la colonne. La boucle d'injection est une des principales sources de volume extra-colonne.

Solution : Il est possible de contourner la boucle en programmant l'injecteur pendant la méthode d'analyse (après que l'échantillon ait quitté la boucle de l'injecteur). Le tableau 1 et la figure 1 montrent un exemple où la boucle d'injection est contournée après l'injection pour réduire le volume de délai du système.