Optimización del sistema de LC para el rendimiento de UHPLC en cualquier HPLC

El método HPLC - Porqué esto es importante?

Las siguientes sugerencias de mejora relacionadas con el método aumentarán el rendimiento de todas las separaciones en cromatografía. Cuando se utilizan columnas core-shell, las siguientes cosas pueden mejorar significativamente el rendimiento de su método.

Los métodos de HPLC deben trabajar primero para enfocar la muestra en la parte superior de la columna, y luego minimizar la dispersión de la muestra a través de la columna. Si minimiza el ensanchamiento de la banda reduciendo la dispersión de la muestra, mejorará la sensibilidad y la resolución de su pico.

La incorporación de una programación sencilla del inyector en el método puede minimizar el volumen extra de la columna para mejorar la forma y la eficacia de los picos, especialmente para las separaciones rápidas de LC.

El problema: todos los picos son anchos

1. Comprobar el volumen de la muestra: Comprobar el volumen de la muestra: los errores en la carga de la muestra pueden anular la ganancia de rendimiento que pueden conseguir las partículas core-shell. Si se inyecta la muestra en la misma composición orgánica que la fase móvil en condiciones isocráticas, el ancho de banda inicial en la columna es directamente proporcional al volumen de inyección. Por lo tanto, un gran volumen de inyección de muestra, se traducirá en una banda ancha en la columna y dará lugar a una baja eficacia de pico.

Solución: Para reducir la pérdida de eficacia en grandes volúmenes de inyección, es posible preconcentrar la muestra en cabeza de la columna utilizando un diluyente más débil que la fase móvil. También puede reducir el volumen de inyección de la muestra. Cuando se utilizan columnas de alta eficacia, a menudo se requieren volúmenes de muestra más bajos para obtener una buena respuesta de la señal.

2. Comprobar el diluyente de la muestra: comprobar el diluyente de la muestra: si la fuerza orgánica del diluyente es mayor que la de la fase móvil del HPLC, la muestra se cargará como una banda difusa en cabeza de columna del HPLC. Esto puede ocurrir tanto en los métodos isocráticos como en los de gradiente y puede anular gran parte de las ventajas de rendimiento de la columna.

• En los métodos de gradiente, en los que la muestra se inyecta en un disolvente de inyección más fuerte que la fase móvil, el compuesto presenta efectos de surf, lo que da lugar a un ensanchamiento y división de los picos.
• Los métodos isocráticos, en los que el diluyente es más fuerte que la fase móvil, dan lugar a una dispersión excesiva de la muestra.

Solución: Inyectar un disolvente débil. Es mejor utilizar un diluyente que sea más débil o igual en fuerza a la fuerza orgánica de la fase móvil para que la muestra se concentre en la parte superior de la columna, resultando en picos más nítidos (es decir, mayor eficacia).

Objetivos: Seguir reduciendo el tiempo de análisis y las capacidades máximas de los métodos de gradiente.

Examinar el programa de inyectores: Examinar el programa del inyector: El volumen extra de columna antes de la misma provoca la dispersión de la muestra en su camino hacia la columna; el bucle del inyector es una fuente importante de volumen extra de columna.

Solución: Es posible puentear el bucle con un programa del inyector durante el método de análisis (después de que la muestra haya salido del bucle inyector). La Tabla 1 y la Figura 1 muestran un ejemplo en el que el bucle de inyección se desvía después de la inyección para reducir el volumen de permanencia del sistema.