Astuce technique HPLC/UHPLC
Niveau : Intermédiaire
Exploiter la polyvalence des phases stationnaires chirales à base de polysaccharides pour améliorer la séparation des énantiomères
Les phases stationnaires chirales à base de polysaccharides sont largement utilisées dans les séparations d'énantiomères. L'utilisation d'une phase stationnaire polysaccharidique présente de nombreux avantages, notamment la reconnaissance chirale étendue qu'elle offre grâce aux nombreux sites chiraux présents dans la molécule de sucre qui constitue la phase stationnaire. Le sélecteur chiral est lié à ces molécules de sucre, ce qui offre une plus grande reconnaissance chirale comparativement à d’autres types de phases stationnaires chirales.
Les phases polysaccharidiques fournissent une bonne flexibilité en terme de type de phase mobile utilisée et permettent une utilisation en phase normale, organique polaire, en phase inverse ou encore en SFC, le tout avec une seule colonne chirale. Les phases stationnaires sont solides et robustes et offrent une bonne capacité de charge car elles sont à base de silice.
Le sélecteur chiral des colonnes à base de polysaccharide peut être déposé ou immobilisé sur la particule de silice. Cela peut affecter la sélectivité, soit directement par un changement d'interaction avec la phase, soit indirectement par l'utilisation de différents types de solvants selon que vous utilisez une phase immobilisée ou une phase déposée.
La plupart des phases stationnaires chirales à base de polysaccharides sont déposées, ce qui signifie que la phase stationnaire n'est pas liée de manière covalente à la silice. Ces dernières années, un certain nombre de sélecteurs chiraux ont été immobilisés sur la particule de silice, ce qui signifie qu'ils sont liés de manière covalente et qu'ils présentent une plus grande stabilité vis-à-vis d’une plus large gamme de solvants, notamment des solvants « plus agressifs ». La possibilité d'utiliser une gamme plus large de solvants augmentent les possibilités de modifier la sélectivité avec ces sélecteurs chiraux. Nous donnons ci-dessous quelques conseils sur la manière de maximiser la sélectivité chirale en utilisant des phases stationnaires chirales polysaccharidiques immobilisées.
Lorsque vous utilisez une phase immobilisée, vous pouvez utiliser une gamme plus large de solvants organiques pendant le développement de méthode, ce qui peut vous permettre de séparer des énantiomères problématiques en utilisant des solvants organiques plus puissants.
Ici, la résolution à la ligne de base de l'ornidazole est obtenue à l’aide de la phase de Cellulose-5 immobilisée en introduisant du MtBe dans la phase mobile et cette combinaison permet une meilleure résolution par rapport à la phase Cellulose-1 déposée.
| Séparation chirale de l'ornidazole à l’aide d’une colonne Lux 5 µ i-Celluslose-5 | |||
|---|---|---|---|
| Colonne | Lux 5µm i-Cellulose-5, Colonne LC, u. | ||
| Dimensions | 250 x 4,6 mm DI | ||
| Référence | 00G-4756-E0 | ||
| Type d'élution | Isocratique | ||
| Éluent A | éthylamine à 0,1 % dans du MtBE | ||
| Débit | 1 ml/min | ||
| Température de colonne | ambiante | ||
| Détection | UV-Vis Abs. à onde variable. (UV) à 254 nm (ambiante) | ||
| Séparation chirale de l'ornidazole à l’aide d’une colonne Lux 5 µm Cellulose-1 en phase normale | |||
|---|---|---|---|
| Colonne | Lux 5µm Cellulose-1, Colonne LC, u | ||
| Dimensions | 250 x 4,6 mm DI | ||
| Référence | 00G-4459-E0 | ||
| Type d'élution | Isocratique | ||
| Éluent A | Hexane / EtOH (80:20) DEA (0,1%) | ||
| Débit | 1 ml/min | ||
| Température de colonne | ambiante | ||
| Détection | UV-Vis Abs. à onde variable. (UV) à 220 nm (ambiante) | ||
Injection avec des solvants organiques forts :
De nombreuses applications nécessitent l'utilisation d'un solvant organique fort pour l'injection. Avec une phase déposée, cela peut entraîner la dissolution de la phase stationnaire et une perte de sélectivité. Avec une phase immobilisée, aucun dommage n'est causé et la sélectivité est maintenue pendant toute la durée de vie de la colonne. Ici, nous ne voyons aucun changement dans la résolution lorsqu'une phase immobilisée est utilisée, même avec un solvant d'injection DMSO.
| Conditions pour toutes les colonnes | |||
|---|---|---|---|
| Colonne | Lux 5µm i-Cellulose-5 | ||
| Dimensions | 250 x 4,6 mm DI | ||
| Référence | 00G-4756-E0 | ||
| Phase mobile | Méthanol/DEA (100:0,1) | ||
| Débit | 1,5 ml/min | ||
| Détection | UV à 280 nm | ||
| Température | 27 °C | ||
| Échantillon | Laudanosine | ||
| Solvant de dilution | Diméthyl Sulfoxyde (DMSO) | ||
En résumé, avec les phases stationnaires chirales polysaccharidiques, vous disposez d'une large reconnaissance chirale et de multiples combinaisons de phases mobiles et de sélectivité. Cela peut contribuer à garantir une bonne résolution énantiomérique pour presque toutes les molécules chirales lorsqu'un processus de criblage méthodique et approfondi est effectué.
Stratégies simplifiées de criblage de colonnes HPLC/SFC chirales
Les phases stationnaires chirales Lux™ immobilisées fournissent une énantiosélectivité complémentaire mais distincte. De plus, le processus d'immobilisation permet l'utilisation d'une large gamme de phases mobiles et de solvants forts.
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