HPLC/UHPLC Technischer Tipp
Niveau: Fortgeschrittene
Vorteile der Verwendung immobilisierter stationärer Phasen bei chiralen Trennungen
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Chirale stationäre Phasen auf Polysaccharidbasis werden häufig für Enantiomerentrennungen verwendet. Die Verwendung einer stationären Phase auf Polysaccharidbasis bietet zahlreiche Vorteile, darunter die breite chirale Erkennungsfähigkeit, die sich aus den zahlreichen chiralen Zentren in den Zuckermolekülen ergibt, die zur Herstellung der stationären Phase verwendet werden. An diese Zuckermoleküle ist der chirale Selektor gebunden, der eine größere chirale Erkennungsfähigkeit als andere Arten von chiralen stationären Phasen bietet.
Polysaccharid-Phasen bieten eine gute Flexibilität in Bezug auf die Art der mobilen Phase, mit der Sie arbeiten können. Sie ermöglichen es dem Anwender, den Normalphase-, polare-organisch, Umkehrphase- und SFC-Modus zu verwenden, und das alles mit einer einzigen chiralen Säule. Die stationären Phasen sind stark und robust und bieten eine gute Beladbarkeit, da sie auf Kieselgel basieren.
Der chirale Selektor auf Polysaccharidbasis kann beschichtet oder auf dem Silikapartikel immobilisiert sein. Das kann sich auf die Selektivität auswirken, entweder direkt durch eine Veränderung der Wechselwirkung mit der stationären Phase oder indirekt durch die Verwendung unterschiedlicher Lösungsmittel, die Ihnen zusätzlich zur Verfügung stehen, wenn Sie eine immobilisierte Phase anstelle einer beschichteten Phase verwenden.
Die meisten chiralen stationären Phasen auf Polysaccharidbasis sind beschichtet, was bedeutet, dass die stationäre Phase nicht kovalent an das darunterliegende Kieselgel gebunden ist. Eine Reihe von chiralen Selektoren wurde in den letzten Jahren auf den Silikapartikel immobilisiert, was bedeutet, dass sie kovalent gebunden sind. Sie weisen deshalb eine größere Stabilität in einer Vielzahl auch von stärkeren Lösungsmitteln auf. Die Möglichkeit, ein erweitertes Spektrum an Lösungsmitteln zu verwenden, hat die Selektivitätsoptionen dieser chiralen Selektoren erhöht. Im Folgenden geben wir einige Tipps zur Maximierung der chiralen Selektivität mit immobilisierten chiralen Polysaccharid-Phasen.
Mit einer immobilisierten Phase steht Ihnen während der Methodenentwicklung eine größere Auswahl an organischen Lösungsmitteln zur Verfügung. Dies kann Ihnen ermöglichen, problematische Enantiomere aufzulösen, indem Sie mit stärkeren organischen Lösungsmitteln arbeiten.
Hier wird die Basislinienauflösung von Ornidazol auf der immobilisierten Cellulose-5-Phase durch Verwendung von MtBE in der mobilen Phase erreicht. Diese Kombination zeigt eine höhere Auflösung im Vergleich zur beschichteten Cellulose-1-Phase.
| Chirale Trennung von Ornidazol auf Lux 5 µm i-Celluslose-5 | |||
|---|---|---|---|
| Säule | Lux 5µm i-Cellulose-5, LC - Saüle | ||
| Abmessungen | 250 x 4,6 mm ID | ||
| Best-Nr: | 00G-4756-E0 | ||
| Elutionsart | Isokratisch | ||
| Eluent A | 0.1 % Ethylamin in MtBE | ||
| Flussrate | 1 ml/min | ||
| Säuletemperatur | Raumtemperatur | ||
| Detektion | UV-Vis Abs bei 254 nm (Raumtemperatur) | ||
| Ornidazol auf Lux 5 µm Cellulose-1 in NP | |||
|---|---|---|---|
| Säule | Lux 5µm Cellulose-1, LC-Säule | ||
| Abmessungen | 250 x 4,6 mm ID | ||
| Best-Nr: | 00G-4459-E0 | ||
| Elutionsart | Isokratisch | ||
| Eluent A | Hexan / EtOH (80:20) DEA (0,1 %) | ||
| Flussrate | 1 ml/min | ||
| Säuletemperatur | Raumtemperatur | ||
| Detektion | UV-Vis Abs.bei 220 nm (Raumtemperatur) | ||
Injektion mit starken organischen Lösungsmitteln:
Viele Anwendungen erfordern die Verwendung eines starken organischen Lösungsmittels zur Injektion - bei einer beschichteten Phase kann dies zur Ablösung der stationären Phase und zum Verlust der Selektivität führen. Mit einer immobilisierten Phase wird kein Schaden angerichtet und die Selektivität bleibt über die gesamte Lebensdauer der Säule erhalten. Hier sehen wir keine Veränderung der Auflösung, wenn eine immobilisierte Phase verwendet wird, selbst mit DMSO als Injektionslösungsmittel.
| Bedingungen für alle Säulen | |||
|---|---|---|---|
| Säule | Lux 5µm i-Cellulose-5 | ||
| Abmessungen | 250 x 4,6 mm ID | ||
| Best. Nr. | 00G-4756-E0 | ||
| Mobile Phase | Methanol/DEA (100:0.1) | ||
| Flussrate | 1.5 ml/min | ||
| Detektion | UV @ 280 nm | ||
| Temperatur | 27 °C | ||
| Probe | Laudanosine | ||
| Probenlösungsmittel | Dimethylsulfoxid (DMSO) | ||
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Sie mit chiralen stationären Phasen auf Polysaccharidbasis eine breite chirale Erkennungsfähigkeit und eine große Auswahl an mobilen Phasen und Selektivitäten zur Verfügung haben. Dies kann helfen, eine gute Enantiomerenauflösung für fast alle chiralen Moleküle zu gewährleisten, wenn ein gründlicher Methoden-Screening-Prozess durchgeführt wird.
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Lux™ immobilisierte chirale stationäre Phasen bieten eine komplementäre, aber ausgeprägte Enantioselektivität für ein breites Spektrum an Chiralität. Darüber hinaus ermöglicht der Immobilisierungsprozess die Verwendung einer breiten Palette von mobilen Phasen und eine hohe Lösungsmittelkompatibilität.
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