Cette astuce technique traite un sujet fondamental et crucial : Comment choisir les dimensions correctes de votre colonne GC ? Lors du démarrage d'un nouveau projet ou lors de l'amélioration d'une méthode existante, il est important d'évaluer la contribution que chaque dimension de colonne (longueur, diamètre interne (DI) et épaisseur du film) apporte à la résolution, à la sensibilité et à la robustesse de la méthode.
Un autre facteur à considérer lors de la sélection de colonnes GC est la fiabilité du fabricant. Les fabricants effectuent plusieurs tests sur leurs colonnes avant de les remettre aux clients. Ces tests incluent la résolution de certaines paires critiques, le test de perte de phase stationnaire de la colonne, le facteur de rétention des analytes, l'efficacité de la colonne, etc. Assurez-vous de sélectionner un fabricant qui fournit des colonnes testées individuellement pour le contrôle qualité.
Pour maximiser l’efficacité en GC, la longueur de la colonne, le diamètre interne (DI) et l’épaisseur du film ont chacun un effet significatif. Connaître l'effet des dimensions de colonne sur une séparation GC aidera non seulement à sélectionner la dimension de colonne la plus adaptée, mais également à choisir une autre dimension pour obtenir une séparation chromatographique efficace, et éventuellement réduire le temps d'analyse.
Voyons en détail comment ces paramètres influencent la séparation.
Longueur de la colonne
Des colonnes plus longues peuvent améliorer la résolution, mais elles augmentent également les temps d'analyse. Dans des conditions isothermes, doubler la longueur de la colonne augmente la résolution de seulement 41%, mais double le temps d'analyse ! Choisissez une longueur de colonne qui assure un bon compromis entre efficacité et temps d’analyse.
Diamètre interne (DI)
Le diamètre interne de la colonne (DI) a un impact important sur la résolution et la capacité de charge de l'échantillon. Contrairement à la longueur des colonnes, l'utilisation de colonnes avec un DI plus faible peut réduire les temps d'analyse, car la longueur de colonne requise avec un DI réduit est souvent plus courte en raison de l'efficacité accrue.
Epaisseur du film
L'épaisseur du film détermine la rétention du soluté et joue un rôle important dans la séparation. Les colonnes à film mince sont plus rapides et offrent une résolution plus élevée, mais une capacité de charge plus faible. Dans la plupart des cas, choisissez le film le plus mince possible qui offre toujours une rétention adéquate. Lorsque vous travaillez avec des échantillons actifs, l'utilisation d'un film légèrement plus épais peut améliorer considérablement la forme des pics.