Wskazówki techniczne HPLC / UHPLC
Poziom: Podstawy
Niebezpieczeństwo niedopasowania fazy ruchomej
Łatwo jest pomyśleć, że próbka po elucji z kolumienki używanej do ekstrakcji do fazy stałej (SPE) jest gotowa do dozowania na kolumnę analityczną. Chociaż próbka jest teraz znacznie czystsza, nie zawsze jest tak, że bezpośredni nastrzyk na kolumnę pozwoli uzyskać idelane wyniki. Niedopasowanie rozpuszczalnika jest znaną przyczyną złego kształtu piku, dlatego należy zwrócić uwagę na moc rozpuszczalnika stosowanego na etapie elucji każdej ekstrakcji SPE.
Rozpuszczalnik, którym eluowana jest próbka, ogólne stężenie próbki i warunki fazy ruchomej metody powinny być oceniane podczas tworzenia protokołów przygotowania próbek. Nastrzyk 100% rozpuszczalnika organicznego, gdy początkowe warunki fazy ruchomej zaczynają się od wysokiej zawartości wody (90%), może spowodować niedopasowanie rozpuszczalnika w systemie, jak widać na poniższym obrazku 2. Idealnie byłoby, gdyby próbka znajdowała się w rozpuszczalniku, który ściśle odpowiada początkowemu stosunkowi fazy ruchomej metody LC, aby zapobiec wystąpieniu problemów z kształtem piku.
Należy zwrócić uwagę, że nie wszystkie proporcje rozpuszczalnika elucyjnego na etapie SPE są kłopotliwe dla chromatografii. Dobrym przykładem korzystnego rozpuszczalnika elucyjnego jest użycie produktu Phree™ Protein Precipitation do przygotowania próbek do analizy w trybie HILIC (chromatografia cieczowa z oddziaływaniem hydrofilowym). Protokół Phree wymaga rozcieńczenia próbek w stosunku 3 : 1 (acetonitryl : woda), aby etap wytrącania białek zakończył się powodzeniem. Tryb HILIC rozpoczyna się przy wysokich stężeniach acetonitrylu, ale nadal wymaga obecności wody w próbce w celu uzyskania optymalnego kształtu piku. Próbka eluowana z Phree jest już w idealnym stosunku rozpuszczalnika dla trybu HILIC i nie jest wymagane dalsze przetwarzanie. Z drugiej strony, jeśli analiza ma na celu wykorzystanie wymiany jonowej jak na kolumnie Rezex™, obecność acetonitrylu w próbce może powodować problemy.
Próbka w 50% metanolu
Próbka w 100% metanolu
Znaki towarowe
Phree i Rezex są znakami towarowymi firmy Phenomenex.
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
CONNECT WITH US
