HPLC/UHPLC Technischer Tipp
Niveau: Grundlagen
Die Gefahr eines falschen Injektionslösungsmittels
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Es ist wünschenswert, dass eine Probe, die von einer Festphasenextraktionskartusche (SPE) eluiert, direkt auf die analytische Säule injiziert werden kann. Auch wenn die Probe jetzt wesentlich sauberer ist, führt die direkte Injektion auf die Säule nicht immer zu einer perfekten Chromatographie. Ein falsches Injektionslösungsmittel ist eine bekannte Ursache für eine schlechte Peak-Form. Daher müssen Sie darauf achten, welche Lösungsmittelstärke für die Proben im Elutionsschritt einer SPE verwendet wird.
Das Lösungsmittel, mit dem die Probe eluiert wird, die Gesamtkonzentration der Probe und die Bedingungen der mobilen Phase der Methode sollten bei der Erstellung von Probenvorbereitungsprotokollen berücksichtigt werden. Eine Injektion in 100 % organischem Lösungsmittel, wenn die Ausgangsbedingungen der mobilen Phase mit einem hohen Wasseranteil (90 %) beginnen, kann zu einer negativen Beeinflussung des Chromatographie-Systems durch das falsche Lösungsmittel führen, wie in Abbildung 1 unten zu sehen ist. Im Idealfall befindet sich die Probe in einem Lösungsmittel, das den Ausgangsbedingungen der mobilen Phase der LC-Methode entspricht, um Probleme mit der Peak-Form zu vermeiden.
Denken Sie daran, dass nicht alle Elutionslösungsmittel-Zusammensetzungen für die Chromatographie problematisch sind. Ein gutes Beispiel für ein günstiges Elutionslösungsmittel ist, wenn das Phree™ Produkt zur Proteinfällung zur Vorbereitung von Proben für die Analyse im HILIC-Modus (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography) verwendet wird. Das Phree-Protokoll sieht vor, dass die Proben in einem Verhältnis von 3 : 1 (Acetonitril : Wasser) gemischt werden, damit der Proteinfällungsschritt erfolgreich ist. Der HILIC-Modus beginnt mit einem hohen Acetonitril-Anteil, erfordert aber immer noch die Anwesenheit von Wasser in der Probe für eine optimale Peak-Form. Die Probe, die von dem Phree Proteinfällungsprodukt eluiert wird, hat bereits das ideale Lösungsmittelverhältnis für den HILIC-Modus und es ist keine weitere Anpassung erforderlich. Wenn Ihre Analyse jedoch den Ligandenaustauschmechanismus mit Rezex™ verwendet, könnte das Vorhandensein von Acetonitril in der Probe Probleme verursachen.
Probe in 50% Methanol
Probe in 100% Methanol
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Phree und Rezex sind Marken von Phenomenex.
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
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