Astuces techniques sur la préparation d’échantillon
Niveau : débutant
En quoi la SPE en phase normale (NP) est-elle différente de la SPE en phase inverse (RP) ? Comment puis-je décider laquelle utiliser ?
La SPE en phase normale utilise les interactions polaires comme mécanisme de rétention. Ces interactions comprennent les liaisons hydrogène, les interactions dipôles-dipôles, les dipôles induits, les interactions π-π, etc. Les interactions se font entre les groupes fonctionnels polaires des analytes et un sorbant polaire.
La phase inverse utilise des interactions non polaires et hydrophobes comme mécanismes de rétention. Ces interactions incluent les liaisons de Van-der-Waals, les forces de London,les interactions π-π, etc. Ces interactions se font entre des parties riches en carbone et hydrophobes des analytes et du sorbant.
Dans le cas de matrices uniquement solubles dans les solvants organiques, la phase normale est recommandée. Il peut s'agir de matrices telles que l'huile, les graisses ou le beurre.
Idéalement, l'échantillon est dilué dans un solvant non polaire (par ex. l'hexane) avant son chargement. L'échantillon peut ensuite être lavé avec de l'hexane ou du chlorure de méthylène à 5% dans de l'hexane (analogue à un lavage avec du MeOH à 5% dans de l'eau, dans des procédés de SPE en phase inverse pour l'élimination des interférences de matrice). L'élution se fera ensuite avec un solvant polaire pouvant rompre les interactions polaires entre les analytes et le sorbant.
Un fractionnement peut être effectué en appliquant des solvants dans l'ordre croissant de polarité ou des mélanges de solvants de polarités différentes.
À droite, une mention rapide de solvants par polarité croissante, pour les méthodes SPE en phase normale.
Solvants par ordre de polarité
| De la plus faible à la plus forte |
|---|
| Hexane |
| Isooctane |
| Tétrachlorure de carbone |
| Toluène |
| Benzène |
| Méthyl tert-butyl éther (MTBE) |
| Chloroforme |
| Dichlorométhane |
| Éther diéthylique |
| Acétate d'éthyle |
| Tétrahydrofurane (THF) |
| Acétone |
| Acétonitrile |
| 40% MeOH dans de l'acétonitrile |
| 20% MeOH dans de l'Ether diéthylique |
| 20% MeOH dans du dichlorométhane |
| Isopropanol |
| Méthanol |
| Eau |
| Acide acétique |
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