Wskazówka techniczna dotycząca przygotowania próbki
Poziom: Podstawy
Czym różni się SPE z fazą normalną (NP) od SPE z fazą odwróconą (RP)? Jak zdecydować, którego z nich użyć?
SPE w fazie normalnej wykorzystuje oddziaływania polarne jako mechanizm retencji. Oddziaływania te obejmują wiązanie wodorowe, dipol-dipol, indukowany dipol, π-π itp. Oddziaływania te zachodzą pomiędzy polarnymi grupami funkcyjnymi analitów i polarnymi grupami związanymi na sorbencie.
Faza odwrócona wykorzystuje niepolarne, hydrofobowe interakcje jako mechanizm retencji. Interakcje te obejmują oddziaływania Van-der-Waalsa, dyspersję Londona, π-π itp. Oddziaływania te zachodzą między bogatymi w węgiel, hydrofobowymi częściami zarówno analitów, jak i sorbentu.
W przypadku matryc próbek, które są rozpuszczalne tylko w rozpuszczalnikach organicznych, należy zastosować metodę z użyciem fazy normalnej. Przykładami takich matryc są olej, smar lub masło.
W idealnym przypadku próbka jest rozcieńczana rozpuszczalnikiem niepolarnym (np. heksanem) przed jej załadowaniem na kolumienkę. Próbkę można następnie przemyć heksanem lub 5% chlorkiem metylenu w heksanie (analogicznie do przemywania 5% MeOH w wodzie w metodach RP SPE w celu usunięcia zanieczyszczeń matrycy). Elucja zostanie przeprowadzona za pomocą polarnego rozpuszczalnika, który może przerwać polarne interakcje między analitami a sorbentem.
Frakcjonowanie można przeprowadzić stosując rozpuszczalniki w kolejności rosnącej polarności lub mieszaniny rozpuszczalników o różnej polarności.
Poniżej znajduje się szybkie odniesienie do rozpuszczalników w rosnącej polarności, dla metod SPE w fazie normalnej.
Szereg polarności rozpuszczalników
| Od wysokiej do niskiej |
|---|
| Heksan |
| Izooktan |
| Czterochlorek węgla |
| Toluene |
| Benzene |
| Eter tert-butylo-metylowy |
| Chloroform |
| Dichlorometan |
| Eter dietylowy |
| Octan etylu |
| Tetrahydrofuran |
| Aceton |
| Acetonitryl |
| 40% MeOH w acetonitrylu |
| 20% MeOH w eterze dietylowym |
| 20% MeOH w dichlorometanie |
| Isopropanol |
| Methanol |
| Woda |
| Kwas octowy |
Phenomenex is a technology leader committed to developing novel analytical chemistry solutions that solve the separation and purification challenges of researchers worldwide.
CONNECT WITH US
