Más reactivos de derivatización para GC-Los tampones contraatacan

Consejo técnico sobre cromatografía de gases

Cambiar idioma

Francés

Aleman

Español

Italiano

Polaco

Checo

Nuestro consejo técnico anterior hablaba de los reactivos de sililación que pueden utilizarse para derivar una serie de analitos polares, ácidos y básicos para mejorar la volatilidad y la forma del pico durante la cromatografía de gases. Los reactivos de sililación no son los únicos que se utilizan para derivar grupos amino y ácidos carboxílicos para el análisis por GC. Los halogenuros primarios y los cloroformatos son dos reactivos habituales en la derivatización de analitos para HPLC, y pueden adaptarse fácilmente a los flujos de trabajo de preparación de muestras para GC.

Los reactivos de cloroformato se dirigen a las aminas primarias y secundarias para generar carbamatos, por lo que un reactivo de cloroformato común para el GC es el cloroformato de propilo. Prepare el reactivo de cloroformato en un disolvente aprótico miscible en agua, como el acetonitrilo, y prepare por separado un tampón de borato de sodio con pH 9,0 -10,0. El borato de sodio es el tampón preferido para minimizar las reacciones secundarias del reactivo de cloroformo, pero pueden utilizarse otros tampones de pH básico. La reacción generalmente requiere volúmenes iguales de solución tampón y de reactivo de cloroformato, ambos lo suficientemente pequeños como para llenar la mitad de un vial cuando se combinan. Agite el vial durante aproximadamente 1 a 5 minutos a temperatura ambiente para completar la reacción. El truco es la limpieza, para lo cual se puede aplicar directamente hexano a la mezcla acuosa de reacción para realizar una extracción líquido-líquido. El hexano se separará en la capa superior que contendrá los analitos derivatizados, y que es fácilmente accesible con una pipeta.

Se pueden utilizar haluros primarios para derivar los ácidos carboxílicos en ésteres. Dos reactivos comunes son la 2,4'-Dibromoacetofenona (DBAP) y el Pentafluorobenzobromuro (PFB-Br). La ventaja del PFB-Br es la selectividad y sensibilidad de los analitos derivados hacia los detectores ECD, mientras que el DBAP también permite la detección ECD. Las condiciones de reacción son comparables a las del cloroformato, incluyendo una extracción líquido-líquido para capturar el analito derivado. El reactivo de haluro primario se disuelve en un disolvente aprótico que es miscible con el agua. El analito carboxilado objetivo puede tratarse con un tampón de fosfato neutro, al que luego se añade la solución de reactivo derivatizante. Si el disolvente reactivo es miscible en agua, la reacción puede proceder con o sin un catalizador alquilamino adicional, y el éster resultante puede extraerse en hexano. Hay que tener en cuenta que la derivatización puede durar al menos una hora y puede requerir temperaturas elevadas.

Hay muchas variedades de los protocolos generales compartidos arriba, particularmente cuando se trabaja con PFB-Br. El reactivo derivatizante puede disolverse intencionalmente en un solvente inmiscible en agua, dependiendo de las consideraciones más amplias de la propia muestra. Lo importante es que elija el protocolo que se ajuste a las características químicas generales de su analito y a la matriz de la muestra con la que comienza su experimento.