Astuces techniques sur la préparation d’échantillon
Niveau : débutant
Le séchage excessif des cartouches SPE à base de silice peut entraîner une mauvaise récupération des échantillons
Pour la plupart des applications SPE en phase inverse utilisant un matériel SPE à base de silice (par exemple celles utilisant Strata™ C18-E), les cartouches (ou puits dans le cas de plaques 96 puits) sont initialement conditionnées avec un solvant organique tel que le méthanol puis équilibrées avec de l'eau ou un tampon. Si on laisse sécher les sorbants SPE à base de silice pendant de longues périodes pendant ces étapes de conditionnement, ils peuvent présenter une faible rétention des analytes cibles, en particulier si les composés cibles sont de nature polaire.
Il est donc essentiel que les utilisateurs de SPE portent une attention particulière à leurs méthodes durant cette étape cruciale de conditionnement afin d'obtenir des résultats précis et reproductibles.
La figure ci-dessous montre deux cartouches Strata C18-T (1 g / 6 ml) chargées avec 4 ml d'un colorant bleu (CuCl2). La cartouche sur la gauche (A) a d'abord été conditionnée en utilisant 12 ml de méthanol, puis a été séchée pendant dix minutes sous vide poussé (10 "de Hg) et a ensuite été équilibrée avec 12 ml d'eau. Comme vous pouvez le voir sur la figure, le colorant bleu se trouve uniformément réparti dans tout le lit de sorbant. En revanche, la cartouche sur le côté droit (B) a été conditionnée avec du méthanol, suivi immédiatement par de l'eau sans aucun séchage. Dans ces conditions, le colorant bleu est visible sous la forme d'une bande étroite et focalisée en tête du lit de sorbant. Après l'élution, la récupération de la cartouche B était beaucoup plus élevée que celle de la cartouche A (la cartouche séchée). Cette différence dans la récupération peut être attribuée principalement à la mauvaise rétention du colorant due au séchage du lit de sorbant.
Astuces pour prévenir le séchage excessif accidentel et éviter la perte d'analyte
• Ne laissez pas votre lit sécher à n'importe quelle étape (à moins que cela ne soit spécifiquement indiqué dans la méthode).
• Utiliser un écoulement par gravité comme une alternative au vide pour éviter le séchage excessif.
• Centrifuger à de faibles vitesses (par exemple 500 tr / min) ou utiliser une pression positive.
• Passer à un sorbant polymérique équivalent, tel que Strata-X, qui ne montre pas de changements de rétention et de récupération en cas de séchage.
A. Sorbant base silice greffé C18 séché après conditionnement au méthanol
B. Sorbant base silice greffé C18 conditionné sans séchage
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