Suggerimento Tecnico per la Preparazione del Campione
Livello: Base
Come evitare che la cartuccia SPE si secchi con conseguente perdita di analita
Per la maggior parte delle applicazioni SPE in fase inversa che utilizzano un supporto SPE a base di silice (ad esempio quelli che utilizzano Strata™ C18-E), le cartucce (o i pozzetti nel caso di 96-well plates) vengono inizialmente condizionate utilizzando un solvente organico come il metanolo, seguito dal lavaggio con acqua o un tampone. Se si permette alle SPE a base di silice di seccarsi durante i passaggi di condizionamento, si avrà una scarsa ritenzione per gli analiti target, specialmente se di natura polare. È quindi essenziale che gli operatori prestino molta attenzione al fine di ottenere risultati accurati e riproducibili.
La figura seguente mostra due cartucce Strata C18-T (1 g/6 mL) che sono state caricate con 4 mL di un colorante blu (CuCl2). La cartuccia a sinistra (A) è stata prima condizionata utilizzando 12 mL di metanolo, poi è stata asciugata per dieci minuti sotto vuoto (10mm di Hg), seguita da 12 mL di acqua. Come puoi vedere dalla figura, il colorante blu si trova uniformemente distribuito in tutto il letto assorbente. Al contrario, la cartuccia sul lato destro (B) è stata condizionata con metanolo, seguito immediatamente dall'acqua senza asciugare la cartuccia sotto vuoto. In queste condizioni, la tintura blu è visibile in una fascia stretta e focalizzata alla testa del letto assorbente. Dopo l'eluizione, il recupero dalla cartuccia B è stato di gran lunga superiore al recupero dalla cartuccia A (la cartuccia essiccata). Questa differenza di recupero può essere attribuita principalmente alla scarsa ritenzione del composto colorato.
Suggerimenti per evitare di portare a secco la cartuccia accidentalmente, con conseguente perdita di analita
• Non lasciare asciugare il sorbente in nessun passaggio (a meno che non sia specificamente indicato nel metodo).
• Eluire per gravità, in alternativa all’applicazione di un vuoto troppo spinto.
• Centrifugare a bassa velocità (e.g. 500RPM) o usare una pressione positiva.
• Passare a un equivalente polimerico come Strata-X, in cui un'essicazione accidentale non incide nè sulla ritenzione nè sul recupero.
A. SPE C18 essiccato dopo condizionamento con metanolo
B. SPE C18 condizionato senza essiccazione
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