Gradientová eluce a doba reekvilibrace
Při použití kolony v režimu gradientu je na konci gradientu určitý časový úsek, během kterého musí být kolona znovu připravena pro další analýzu. Během této doby je důležité, aby byla kolona kondicionována zpět do výchozích podmínek gradientové metody (tento krok v procesu je znám jako reekvilibrace nebo teq).
Aby byla zajištěna úplná reekvilibrace, je důležité zahrnout do Vašeho gradientového cyklu doby zpoždění gradientu, aby se zohlednil objem setrvání v systému a doba potřebná k tomu, aby se rozpouštědlo dostalo do kolony. Obr. 1 znázorňuje, jak by mohlo vypadat zpoždění gradientu pro konkrétní metodu.
Vysvětlivky pro obr. 1
A. Naprogramované složení mobilní fáze
B. Složení mobilní fáze v koloně
Reekvilibrace je dokončena, když prodloužení doby ekvilibrace neovlivňuje retenční čas analytů separovaných při následném gradientovém cyklu.
Doba potřebná k úplné reekvilibraci kolony bude významně záviset na podmínkách metody, rozměrech kolony a do určité míry na citlivosti metody. Některé sloučeniny jsou citlivější na mírné změny ve složení mobilní fáze než jiné sloučeniny. K zajištění úplné reekvilibrace se často požaduje 10 objemů kolony, avšak v praxi obvykle postačí 1-2 objemy. Jedním z nejlepších způsobů, jak dosáhnout reekvilibrace kolony je sledovat průběh tlaku Vaší metody. Při zvýšení podílu organického rozpouštědla v mobilní fázi bude docházet ke kolísání tlaku. Zda bude tlak růst nebo klesat závisí na volbě rozpouštědla. Avšak hledáním návratu k původnímu počátečnímu tlaku během cyklu můžete určit vhodnou dobu potřebnou k dosažení úplné reekvilibrace (obr. 2).
Vysvětlivky pro obr. 2
A. Původní protitlak
B. Stabilní návrat k původnímu protitlaku
Při zvažování doby reekvilibrace jsou více dotčeny dříve eluující píky. Pokud máte píky eluující na začátku Vašeho gradientu, Váš reekvilibrační cyklus bude muset být delší než u aplikací, kde se píky eluují později.
Nakupovat online
Webináře na vyžádání
Nové články blogu